Ανάλυση ούρων και σάλιο για φυματίωση

Η ποικιλία των διαφορετικών αναλύσεων για τη φυματίωση δεν εξηγείται από την ευκολία διάγνωσης αυτής της νόσου, αλλά από την ύπαρξή της. Οι άνθρωποι από αμνημονεύτων χρόνων προσπάθησε να βρει έναν τρόπο για τον εντοπισμό φθίση στα πρώιμα στάδια, και ως εκ τούτου διεξαχθεί διάφορες μελέτες ασθενών, μερικά από τα οποία είναι πραγματικά ριζώσει και τις μεθόδους διάγνωσης της νόσου ή ως μέσο για την παρακολούθηση της διαδικασίας της νόσου.

Τι είναι τα τεστ ούρων και του σάλιου;

loading...

Η ανάλυση Bac για τη φυματίωση του σάλιου και των ούρων γίνεται για να ανιχνεύσει την παρουσία ενός παράγοντα μέσα στο σώμα. Ωστόσο, ο σκοπός αυτών των μελετών είναι η επιβεβαίωση της νόσου με τα υπάρχοντα συμπτώματα αντί να τα βρει, αφού για την πρωτογενή προληπτική διάγνωση υπάρχουν πολλές άλλες πιο αξιόπιστες μέθοδοι.

Επιπλέον, τα ούρα ή πτυέλων και ανάλυση σάλιο για τους γιατρούς ΤΒ μπορεί να πραγματοποιήσει για την ταυτοποίηση της μετάβασης μια κλειστή μορφή της νόσου στην ανοικτή, η οποία χαρακτηρίζεται από την απελευθέρωση μεγάλων ποσοτήτων των βακίλλων με φυσικά υγρά και τα περιττώματα του ασθενούς, και ως εκ τούτου να γίνει πολύ επιδημιολογική επικίνδυνη για τους άλλους.

Εξέταση ούρων

loading...

Η απάντηση στο ερώτημα πώς να περάσει μια εξέταση ούρων για τη φυματίωση είναι αρκετά απλή. Τα ούρα για φυματίωση συλλέγονται όπως οποιαδήποτε γενική ανάλυση αυτού του υγρού, οικεία σε όλους από την παιδική ηλικία:

  1. Είναι απαραίτητο να συλλέγεται το πρώτο τμήμα των ούρων το πρωί, ενώ μόνο το μεσαίο τμήμα συλλέγεται και όχι αυτό που αφήνει το πρώτο ή το τελευταίο.
  2. Πριν από τη συλλογή, είναι απαραίτητο να πλυθούν καλά τόσο το δοχείο όσο και τα ίδια τα ουρογεννητικά όργανα, έτσι ώστε να μην μπορεί να εισέλθει τίποτα περιττό στο βάζο: πρωτεΐνες, αίμα, μικρόβια κλπ.
  3. Η απαιτούμενη ποσότητα υγρού για τη μελέτη είναι μόνο 50-100 ml, οπότε μην φέρετε ένα μισό λίτρο βάζο ούρων.

ΟΑΜ μπορεί να ληφθεί σε οποιαδήποτε κλινική, ωστόσο, μόνο ειδικά εργαστήρια μπορούν να βρουν φυματίωση φυματίωσης που δεν είναι διαθέσιμη σε κάθε τοποθεσία στη Ρωσία. Τα φυσιολογικά αποτελέσματα αυτής της έρευνας μοιάζουν με αυτό:

  1. Χρώμα: κίτρινο, ηλιόλουστο κίτρινο ή άχυρο.
  2. Διαφάνεια: υψηλή.
  3. Οσμή: ασταθής.
  4. Τιμή αντίδρασης: 4-7.
  5. Πυκνότητα: 1012-1022 g / l.
  6. Πρωτεΐνη: όχι, αλλά μερικές φορές επιτρέπεται μια τιμή μέχρι 0,033 g / l.
  7. Γλυκόζη: έως 0,8 mmol / l.
  8. Στοιχεία κετονών: όχι.
  9. Χολερυθρίνη: όχι.
  10. Ουρολινογόνο: 5-10 mg / l.
  11. Αιμοσφαιρίνη: όχι.
  12. Ερυθροκύτταρα: στις γυναίκες, η μέγιστη επιτρεπτή τιμή είναι έως τρία, και στους άνδρες μέχρι 1 στο οπτικό πεδίο.
  13. Λευκοκύτταρα: ο επιτρεπόμενος αριθμός οργάνων στο οπτικό πεδίο έως 6 στις γυναίκες και έως 3 στους άνδρες.
  14. Επιθηλιακά κύτταρα: έως 10 τεμ. στο θέαμα.
  15. Κύλινδροι: Όχι ή υπάρχει ατομική υαλίνη.
  16. Αλάτια: όχι.
  17. Βακτήρια: όχι.
  18. Μανιτάρια: όχι.
  19. Παράσιτα: όχι, αλλά αν υπάρχει, τότε δεν είναι τρομερό: μόνο στην περίπτωση αυτή, η θεραπεία με ανθελμινθικά φάρμακα πραγματοποιείται.

Οι δείκτες OAM για τη φυματίωση παραμένουν συνήθως οι ίδιοι. Οι μόνες εξαιρέσεις είναι οξείες μορφές της νόσου, όταν τα ούρα μεταβάλλεται λόγω ανωμαλία σε εσωτερικά όργανα και σε χρόνιες αλλοιώσεις των πνευμόνων ή οστά, όταν η δοκιμασία μπορεί να είναι συμπτώματα της αμυλοείδωσης - διαταραχές του μεταβολισμού των πρωτεϊνών στις οποίες η πρωτεΐνη θα είναι παρόντες στα αποτελέσματα της έρευνας.

Η μόνη εξαίρεση είναι η φυματίωση των νεφρών ή των ουροφόρων οδών - η πιο κοινή εξωπνευμονική μορφή της νόσου, που προκαλείται από τη μεταφορά της λοίμωξης με την κυκλοφορία του αίματος, στην οποία η εξέταση ούρων για φυματίωση ποικίλλει σημαντικά. Στην περίπτωση αυτή παρατηρούνται τα εξής φαινόμενα:

  • έντονα όξινη επίμονη αντίδραση.
  • λευκοκυτταρία - λευκά αιμοσφαίρια στα ούρα.
  • πρωτεϊνουρία - μια πρωτεΐνη στα ούρα.
  • ερυθροκυτταρία - αίμα στα ούρα.
  • πυουρία - πίνετε στα ούρα.

Επίσης, στην οξεία ασθένεια ή κατά τη διάρκεια της φυματίωσης των νεφρών και των ουροφόρων οδών λοιμώξεις στα ούρα είναι παρούσα βακίλλων δραστική μορφή του παράγοντα, η οποία καθορίζεται με χρώση Ziehl-Nelson.

Εξέταση του σάλιου

loading...

Στην πραγματικότητα, ο LHC δεν παράγει μια εξέταση σάλιου για τη φυματίωση. Αναλύοντας το σάλιο, αρκετά συχνά, οι άγνωστοι άνθρωποι αποκαλούν εξέταση πτυέλων για φυματίωση. Αντί πτυέλων ανάλυση του σάλιου για τη φυματίωση μπορεί να γίνει μόνο στην περίπτωση των πολύ μικρών νεογέννητα μωρά που δεν είναι σε θέση να φτύσει το υγρό αποχρεμπτικό, διότι καταπίνει αυτόματα μία φορά αμέσως μετά την απόχρεμψη. Ωστόσο, στην περίπτωση αυτή, οι γιατροί απλά ρίξτε μια βιοψία του ιστού ή να αποσύρει πνευμονική μυστικό με καθετήρα, δεν σέρνεται με το σάλιο.

Πτύελα ανάλυση επαναλαμβάνεται με παθογόνο επίσης χρησιμοποιώντας μέθοδο Ziehl-Nelson. Σε αυτή την περίπτωση, επιπλέον των βακίλλων είναι μερικά σημάδια του πνεύμονα παθολογίας μπορεί να δει με γυμνό μάτι: ινώδη εκμαγεία, πύον, αίμα, κομμάτια ιστού, και τα λεγόμενα φακές - μεγάλα εγκλείσματα ενός κεφαλιού καρφίτσας ή λιγότερο στρογγυλό σχήμα, στο εσωτερικό του οποίου συνήθως έχει ένα τεράστιο αριθμό των βακίλλων.

Μέθοδος χρωματισμού Ziehl-Nelson

loading...

χρώση Μέθοδος Ziehl-Nelson βασίζεται στην αντοχή σε οξύ του Mycobacterium tuberculosis, η οποία μπορεί να χρωματίζεται μόνο σε θερμική επεξεργασία. Κατά τη στιγμή της μελέτης αυτής, σωματικό ιστό, πτύελα, ούρα, αίμα, ή οποιαδήποτε άλλη ουσία, η ανάλυση των οποίων είναι απαραίτητη η παρουσία του Γραφείου να φύγει σε ένα ευνοϊκό περιβάλλον για τους σπόρους για πολλαπλασιασμό των βακίλλων, εφόσον υπάρχουν, φυσικά, και στη συνέχεια θερμαίνεται και βάφονται. Μετά από αυτό, όλα διατηρούνται σε οξύ μέχρις αποχρωματισμού και πάλι το χρώμα είναι ήδη χωρίς θέρμανση σε άλλο χρώμα. Ως εκ τούτου, η ΔΟΕ είναι αρκετά εύκολο να ανιχνεύσει, όπως είναι τα χρώματα του πρώτου χρώμα και μια καλή ξεχωρίζουν.

Σημειωματάριο φθισιατρικής - φυματίωσης

loading...

Όλα όσα θέλετε να μάθετε για τη φυματίωση

Δοκιμές αίματος και ούρων για φυματίωση

loading...

V.A. Koshechkin, Ζ.Α. Ιβάνοβα

Στοιχεία του ερυθρού αίματος, κατά κανόνα, μικρή αλλαγή στη φυματίωση. Μόνο μετά από οξεία απώλεια αίματος από τους πνεύμονες ή τα έντερα μπορεί να υπάρξει αναιμία. Μια μικρή μείωση του επιπέδου της αιμοσφαιρίνης μπορεί να παρατηρηθεί σε χρόνιες μορφές πνευμονικής φυματίωσης ινώδους-σπέρματος.

Ένας από τους δείκτες της δραστηριότητας της διαδικασίας της φυματίωσης είναι το ESR (ρυθμός καθίζησης των ερυθροκυττάρων). Ταχεία ESR συσχετίζεται όχι μόνο με το μήκος της τρέχουσας δραστηριότητας και φρέσκο ​​διαδικασία, αλλά επίσης και με παρόξυνση της χρόνιας, ειδικά fibrocavernous, διεργασίες.

Στοιχεία του κλάσματος λευκοκυττάρων του αίματος να αντιδράσει πιο ενεργά στη διαδικασία της φυματίωσης.
Συμβατικά, υπάρχουν τρεις φάσεις των αλλαγών στο κλάσμα λευκοκυττάρων του αίματος που σχετίζονται με τη φύση των αλλοιώσεων σε πνευμονική φυματίωση.
1. Ουδετεροφιλική φάση του αγώνα. Στο αίμα, η αναλογία των ουδετεροφίλων αυξάνεται, με αποτέλεσμα να υπάρχει μετατόπιση του τύπου προς τα αριστερά. Τα ηωσινόφιλα απουσιάζουν, ο αριθμός των λεμφοκυττάρων και των μονοκυττάρων μειώνεται.
2. Η μονοκυτταρική φάση - Ξεπερνώντας τη μόλυνση. Στο αίμα αυξάνεται ο αριθμός των λεμφοκυττάρων, ο τύπος αίματος μετατοπίζεται προς τα αριστερά, μειώνεται ο αριθμός των ουδετεροφίλων, ανιχνεύονται μεμονωμένα ηωσινόφιλα.
3. Φάση ανάκτησης. Η αναλογία λεμφοκυττάρων και ηωσινοφίλων αυξάνεται. Οι αιματολογικές μετρήσεις ρυθμίζονται σταδιακά.
Αυτή η διαίρεση σε φάσεις αντικατοπτρίζει μόνο τη συνολική αντίδραση του αίματος.

Πυρηνική μετατόπιση ουδετερόφιλων στη φυματίωση
Εκτός από την ποσοτική, η ομάδα των ουδετερόφιλων έχει ένα ποιοτικό χαρακτηριστικό, το οποίο είναι πολύ λεπτότερο και προγενέστερο δείχνει διάφορες παθολογικές διεργασίες.

Η φυματίωση ενηλίκων είναι συνήθως μια δευτερογενής διαδικασία, συνήθως προκαλεί μόνο στο αίμα μια αύξηση στα ουδετερόφιλα. Όταν εκφράζεται διηθητικές μορφές και πνευμονική πνευμονικό ιστό ουδετερόφιλα φθορά φαινομένων βάρδια αριστερά ανιχνεύεται σαφέστατα και μπορεί να φθάσει 20-30% σταθ.

Η πνευμονική διήθηση δεν αποσυντίθεται και οι εστιακές μορφές της φυματίωσης κατά την πρώτη ανίχνευσή τους ή επιδείνωση στη θερμοκρασία του υποφθαλίλου και οι ελάχιστα εκφρασμένες λειτουργικές διαταραχές δίνουν μια λιγότερο έντονη μετατόπιση. Ταυτόχρονα, τα υπόλοιπα στοιχεία της αιμόγραμμα δεν μπορούν να ανιχνεύσουν ανωμαλίες καθόλου. Επομένως, ένας διεξοδικός προσδιορισμός της μετατόπισης του πυρήνα είναι ιδιαίτερα σημαντικός στη φυματίωση.

Το δόγμα της πυρηνικής μετατόπισης των ουδετερόφιλων προωθήθηκε από τον Arnet (1905) με βάση μια μελέτη του αίματος σε διάφορες λοιμώξεις, συμπεριλαμβανομένης της φυματίωσης.

Κάνοντας δύσκολους υπολογισμούς με πολλά σκίτσα, ο Arnet παρατήρησε μια ορισμένη κανονικότητα στη διαμόρφωση των πυρήνων ουδετερόφιλων.

Το αίμα ενός υγιούς ατόμου περιέχει:

  • 5% ουδετερόφιλα με μη αραιωμένο λαιμό, μη κατακερματισμένο πυρήνα (1η τάξη),
  • 35% των ουδετερόφιλων με δύο τμήματα που συνδέονται με μια συσφιγμένη με σπείρες (κλάση II).
  • 41% των ουδετεροφίλων με τρία τμήματα (βαθμός III).
  • 17% των ουδετερόφιλων με τέσσερα τμήματα (βαθμός IV).
  • 2% των ουδετερόφιλων με πέντε τμήματα (κλάση V).

Εκτός από την κατάτμηση του πυρήνα, η Arnet έλαβε επίσης υπόψη το σχήμα της. Έτσι, για την πρώτη τάξη, ξεχώρισε μερικές υποκατηγορίες σχετικά με τον βαθμό κατάθλιψης του μη κατακερματισμένου πυρήνα. Οι υπόλοιπες κλάσεις χωρίζονται σε υποκατηγορίες ανάλογα με το σχήμα των τμημάτων.

Όταν οι λοιμώξεις είναι ανάλογες με τη σοβαρότητά τους, ο αριθμός των πολυ-κατακερματισμένων μορφών μειώνεται, αυξάνεται ο αριθμός των χαμηλά κατακερματισμένων (2-3 τμημάτων) και των μη τμηματοποιημένων (σχετικά νέων κυττάρων).

Στο σχήμα Arnet, ο αριθμός των μη κατακερματισμένων ουδετερόφιλων της κατηγορίας Ι απεικονίζεται στα αριστερά. στο δεξιό είναι ο αριθμός των κυττάρων της κλάσης ΙΙ, στη συνέχεια της κλάσης ΙΙΙ κ.λπ. Συνεπώς, με την αύξηση των μη τμηματοποιημένων και ελαφρώς κατατμημένων μορφών, ο αριθμός των κυττάρων στην αριστερή πλευρά του κυκλώματος αυξάνεται και εμφανίζεται μια "αριστερή μετατόπιση".

Ανάλυση ούρων
Η απέκκριση ούρων σε ασθενείς με φυματίωση είναι σχεδόν φυσιολογική. Παθολογικές αλλαγές στα ούρα μπορεί να είναι εάν η φυματίωση επηρεάζει τα νεφρά ή την ουροδόχο κύστη.
Οι ασθενείς με χρόνιες μορφές πνευμονικής φυματίωσης ή οστών μπορεί να έχουν σημεία αμυλοείδωσης.

3.7 Ανάλυση αίματος και ούρων.

loading...

Τα στοιχεία του ερυθρού αίματος, κατά κανόνα, αλλάζουν ελάχιστα με τη φυματίωση. Μόνο μετά από οξεία απώλεια αίματος από τους πνεύμονες ή τα έντερα μπορεί να υπάρξει αναιμία. Μια μικρή μείωση του επιπέδου της αιμοσφαιρίνης μπορεί να παρατηρηθεί σε χρόνιες μορφές πνευμονικής φυματίωσης ινώδους-σπέρματος. Ένας από τους δείκτες της δραστηριότητας της διαδικασίας της φυματίωσης είναι το ESR (ρυθμός καθίζησης των ερυθροκυττάρων). Ταχεία ESR συσχετίζεται όχι μόνο με το μήκος της τρέχουσας δραστηριότητας και φρέσκο ​​διαδικασία, αλλά επίσης και με παρόξυνση της χρόνιας, ειδικά fibrocavernous διεργασίες. Τα στοιχεία του κλάσματος λευκοκυττάρων του αίματος αντιδρούν πιο ενεργά στη διαδικασία της φυματίωσης.

Συμβατικά, υπάρχουν τρεις φάσεις των αλλαγών στο κλάσμα λευκοκυττάρων του αίματος που σχετίζονται με τη φύση των αλλοιώσεων σε πνευμονική φυματίωση:

  1. Ουδετερόφιλα - η φάση του αγώνα. Στο αίμα, η αναλογία των ουδετεροφίλων αυξάνεται, με αποτέλεσμα να υπάρχει μετατόπιση του τύπου αίματος προς τα αριστερά. Τα ηωσινόφιλα απουσιάζουν, ο αριθμός των λεμφοκυττάρων και των μονοκυττάρων μειώνεται. Η λεμφοπενία είναι χαρακτηριστική των προοδευτικών μορφών φυματίωσης.
  2. Η μονοκυτταρική φάση είναι η υπερνίκηση της μόλυνσης. Στο αίμα αυξάνεται ο αριθμός των λεμφοκυττάρων, ο τύπος αίματος μετατοπίζεται προς τα αριστερά, μειώνεται ο αριθμός των ουδετεροφίλων, ανιχνεύονται μεμονωμένα ηωσινόφιλα.
  3. Η φάση ανάκαμψης. Η αναλογία λεμφοκυττάρων και ηωσινοφίλων αυξάνεται. Οι αιματολογικές μετρήσεις ρυθμίζονται σταδιακά.

Αυτή η διαίρεση σε φάσεις αντικατοπτρίζει μόνο γενικές αντιδράσεις αίματος που δεν αντικατοπτρίζουν την πολυπλοκότητα των αντιδράσεων αίματος σε μια χρόνια λοίμωξη φυματίωσης.

Πυρηνική μετατόπιση ουδετερόφιλων στη φυματίωση.
Εκτός από την ποσοτική, η ομάδα των ουδετερόφιλων έχει ένα ποιοτικό χαρακτηριστικό, το οποίο είναι πολύ λεπτότερο και προγενέστερο δείχνει διάφορες παθολογικές διεργασίες. Η φυματίωση ενηλίκων, συνήθως μετά την αρχική διαδικασία, προκαλεί συχνότερα στο αίμα μόνο μια αύξηση στα ουδετερόφιλα. Όταν εκφράζεται διηθητικές μορφές και πνευμονική πνευμονικό ιστό ουδετερόφιλα φθορά φαινομένων βάρδια αριστερά ανιχνεύεται σαφέστατα και μπορεί να φθάσει 20-30% σταθ.

Πνευμονική διήθηση χωρίς την αποσάθρωση και εστιακή ΤΒ κατά τη διάρκεια της πρώτης παρόξυνση τους ή τον αναγνωριστικό σε θερμοκρασία subfebrile και Just αισθητή λειτουργικών διαταραχών παρέχουν μια λιγότερο έντονη μετατόπιση. Στην περίπτωση αυτή, τα υπόλοιπα στοιχεία της αιμόγραμμα δεν μπορούν τελείως να αποκλίνουν από τον κανόνα. Επομένως, ένας λεπτομερής προσδιορισμός της μετατόπισης του πυρήνα έχει διαγνωστική σημασία στη φυματίωση.
Το δόγμα της πυρηνικής μετατόπισης των ουδετερόφιλων προωθήθηκε από τον Arneth με βάση τη μελέτη του αίματος για διάφορες λοιμώξεις και ειδικά για τη φυματίωση. Κάνοντας δύσκολους υπολογισμούς με πολλά σκίτσα, ο Arnet παρατήρησε μια ορισμένη κανονικότητα στη διαμόρφωση των πυρήνων ουδετερόφιλων. Στο αίμα ενός υγιούς ατόμου, τα ουδετερόφιλα με μη αραιωμένες συστολές, τον μη κατακερματισμένο πυρήνα (κατηγορία Ι) είναι 5%. ουδετερόφιλα με δύο τμήματα ενωμένα με νηματοειδής συστολή (τάξη II), 35%, III τάξη 41%, IV τάξη 17% και κλάση V 2%. Όταν οι λοιμώξεις είναι ανάλογες με τη σοβαρότητά τους, ο αριθμός των πολλών κατατμημένων μορφών μειώνεται, αυξάνεται ο αριθμός των μικρών τμημάτων (2-3 τμήματα) και των μη τμηματοποιημένων μορφών. Στο σχήμα Arnet, ο αριθμός των μη κατακερματισμένων ουδετερόφιλων γράφεται στα αριστερά. βρίσκεται στα δεξιά του αριθμού των κυττάρων της κατηγορίας II, κατηγορίας III και στη συνέχεια t. δ. Ως εκ τούτου, με την αύξηση του αριθμού των μη τμηματικού και η αριστερή πλευρά του εντύπου κυκλωμάτων κυττάρων κατά διαστήματα λίγο αυξημένη και υπάρχει ένα «αριστερή στροφή».

Σημάδια της διαδικασίας της φυματίωσης, εκτός από αλλαγές στην αιματογραφία, είναι η υπονατριαιμία. Είναι η πιο χαρακτηριστική μεταβολική μετατόπιση. Η αιτία της υπονατριαιμίας είναι η ανάπτυξη ενός πνευμονικού ιστού που πάσχει από φυματίωση από μια αντιδιουρητική ορμονική ουσία. Ιδιαίτερα εντατικά, αυτή η ουσία παράγεται κατά την περίοδο των ευρέως διαδεδομένων καυσό-καταστροφικών μορφών.

Ανάλυση ούρων.
Η απέκκριση των ούρων σε ασθενείς με φυματίωση είναι σχεδόν φυσιολογική. Παθολογικές αλλαγές στα ούρα μπορεί να είναι εάν η φυματίωση επηρεάζει τα νεφρά ή την ουροδόχο κύστη. Στα ούρα υπάρχουν πρωτεΐνες, λευκά αιμοσφαίρια, ΜΒΤ. Σε ασθενείς με χρόνιες μορφές πνευμονικής φυματίωσης ή οστών, μπορεί να εντοπιστούν σημεία αμυλοείδωσης (επίμονη προτενουρία, μακροαιτατουρία).

Διάγνωση της φυματίωσης με ανάλυση αίματος και ούρων

loading...

Τα στοιχεία του ερυθρού αίματος, κατά κανόνα, αλλάζουν ελάχιστα με τη φυματίωση. Μόνο μετά από οξεία απώλεια αίματος από τους πνεύμονες ή τα έντερα μπορεί να υπάρξει αναιμία. Μια μικρή μείωση του επιπέδου της αιμοσφαιρίνης μπορεί να παρατηρηθεί σε χρόνιες μορφές ινώδους-σπηλαιώδους πνευμονικής φυματίωσης.

Ένας από τους δείκτες της δραστηριότητας της διαδικασίας της φυματίωσης είναι το ESR (ρυθμός καθίζησης των ερυθροκυττάρων). Η ταχεία ESR συσχετίζεται όχι μόνο με τη δραστηριότητα και την έκταση της τρέχουσας νέας διαδικασίας, αλλά και με την επιδείνωση των χρόνιων, ιδιαίτερα των ινώδους-σπηλαιώδους διεργασιών.

Τα στοιχεία του κλάσματος λευκοκυττάρων του αίματος αντιδρούν πιο ενεργά στη διαδικασία της φυματίωσης.

Συμβατικά, υπάρχουν τρεις φάσεις των αλλαγών στο κλάσμα λευκοκυττάρων του αίματος που σχετίζονται με τη φύση των αλλοιώσεων σε πνευμονική φυματίωση.

  1. Η ουδετερόφιλη φάση του αγώνα. Στο αίμα, η αναλογία των ουδετεροφίλων αυξάνεται, με αποτέλεσμα να υπάρχει μετατόπιση του τύπου προς τα αριστερά. Τα ηωσινόφιλα απουσιάζουν, ο αριθμός των λεμφοκυττάρων και των μονοκυττάρων μειώνεται.
  2. Η μονοκυτταρική φάση είναι η υπερνίκηση της μόλυνσης. Στο αίμα αυξάνεται ο αριθμός των λεμφοκυττάρων, ο τύπος αίματος μετατοπίζεται προς τα αριστερά, μειώνεται ο αριθμός των ουδετεροφίλων, ανιχνεύονται μεμονωμένα ηωσινόφιλα.
  3. Η φάση ανάκαμψης. Η αναλογία λεμφοκυττάρων και ηωσινοφίλων αυξάνεται. Οι αιματολογικές μετρήσεις ρυθμίζονται σταδιακά.

Αυτή η διαίρεση σε φάσεις αντικατοπτρίζει μόνο τη συνολική αντίδραση του αίματος.

Πυρηνική μετατόπιση ουδετερόφιλων στη φυματίωση

Εκτός από την ποσοτική, η ομάδα των ουδετερόφιλων έχει ένα ποιοτικό χαρακτηριστικό, το οποίο είναι πολύ λεπτότερο και προγενέστερο δείχνει διάφορες παθολογικές διεργασίες.

Η φυματίωση ενηλίκων είναι συνήθως μια δευτερογενής διαδικασία, συνήθως προκαλεί μόνο στο αίμα μια αύξηση στα ουδετερόφιλα. Όταν εκφράζεται διηθητικές μορφές και πνευμονική πνευμονικό ιστό ουδετερόφιλα φθορά φαινομένων βάρδια αριστερά ανιχνεύεται σαφέστατα και μπορεί να φθάσει 20-30% σταθ.

Η πνευμονική διήθηση δεν αποσυντίθεται και οι εστιακές μορφές της φυματίωσης κατά την πρώτη ανίχνευσή τους ή επιδείνωση στη θερμοκρασία του υποφθαλίλου και οι ελάχιστα εκφρασμένες λειτουργικές διαταραχές δίνουν μια λιγότερο έντονη μετατόπιση. Ταυτόχρονα, τα υπόλοιπα στοιχεία της αιμόγραμμα δεν μπορούν να ανιχνεύσουν ανωμαλίες καθόλου. Επομένως, ένας διεξοδικός προσδιορισμός της μετατόπισης του πυρήνα είναι ιδιαίτερα σημαντικός στη φυματίωση.

Το δόγμα της πυρηνικής μετατόπισης των ουδετερόφιλων προωθήθηκε από τον Arnet (1905) με βάση μια μελέτη του αίματος σε διάφορες λοιμώξεις, συμπεριλαμβανομένης της φυματίωσης.

Κάνοντας δύσκολους υπολογισμούς με πολλά σκίτσα, ο Arnet παρατήρησε μια ορισμένη κανονικότητα στη διαμόρφωση των πυρήνων ουδετερόφιλων. Το αίμα ενός υγιούς ατόμου περιέχει:

  • 5% ουδετερόφιλα με μη αραιωμένο λαιμό, μη καταγεγραμμένο πυρήνα (1η τάξη).
  • 35% των ουδετερόφιλων με δύο τμήματα που συνδέονται με μια συσφιγμένη με σπείρες (κλάση II).
  • 41% των ουδετεροφίλων με τρία τμήματα (βαθμός III).
  • 17% των ουδετερόφιλων με τέσσερα τμήματα (βαθμός IV).
  • 2% των ουδετερόφιλων με πέντε τμήματα (κλάση V).

Εκτός από την κατάτμηση του πυρήνα, η Arnet έλαβε επίσης υπόψη το σχήμα της. Έτσι, για την τάξη, ξεχώρισε διάφορες υποκατηγορίες σχετικά με τον βαθμό κατάθλιψης του μη κατακερματισμένου πυρήνα. Οι υπόλοιπες κλάσεις χωρίζονται σε υποκατηγορίες ανάλογα με το σχήμα των τμημάτων.

Για λοιμώξεις αναλογία προς τη σοβαρότητά τους σχηματίζει ψυχικής τύπου mnogoseg- αριθμός μειώνεται, ο αριθμός malosegmentirovannyh (2-3 τμήμα) και μη τμηματικού (που είναι σχετικά νεαρά κύτταρα) αυξάνει. Στο σχήμα Arnet, ο αριθμός των μη κατακερματισμένων ουδετεροφίλων της κατηγορίας Ι παρουσιάζεται στα αριστερά. το δικαίωμα είναι ο αριθμός των κυττάρων της κατηγορίας II, κατηγορίας III και στη συνέχεια t. δ. Κατά συνέπεια, μια αύξηση στην μη τμηματικού μορφή και τον αριθμό malosegmentirovannyh αριστερή πλευρά αυξήσεις κυττάρων κύκλωμα και υπάρχει ένα «αριστερή στροφή».

Ανάλυση ούρων

Η απέκκριση ούρων σε ασθενείς με φυματίωση είναι σχεδόν φυσιολογική. Παθολογικές αλλαγές στα ούρα μπορεί να είναι εάν η φυματίωση επηρεάζει τα νεφρά ή την ουροδόχο κύστη.

Οι ασθενείς με χρόνιες μορφές πνευμονικής φυματίωσης ή οστών μπορεί να έχουν σημεία αμυλοείδωσης.

35. Διαγνωστική αξία της μελέτης αίματος και ούρων σε ασθενείς με φυματίωση.

loading...

Δοκιμή αίματος Η αιμοσφαιρίνη και τα ερυθροκύτταρα στις περισσότερες περιπτώσεις παραμένουν αμετάβλητα, εκτός από περιπτώσεις που συνοδεύονται από οξεία απώλεια αίματος. Ο δείκτης που πιστοποιεί την παρουσία μιας δραστικής φυματινής διαδικασίας είναι ο ρυθμός καθίζησης των ερυθροκυττάρων. Η ταχεία ESR είναι χαρακτηριστική όχι μόνο για τη νωπή ενεργή φυματίωση, αλλά και για την επιδείνωση της χρόνιας διαδικασίας. Οι υπόλοιπες παράμετροι της εξέτασης αίματος ποικίλλουν σημαντικά ανάλογα με τη φύση της βλάβης στους πνεύμονες. Αλλαγές στις περιφερειακές παραμέτρους. αίμα με βολβό. καμία ιδιαιτερότητα, ωστόσο, η αιμόγραμμα βοηθά στη διάγνωση. φάσης. επεξεργασία και αξιολόγηση της σοβαρότητας. ροής του. Άτομα που έχουν εξεταστεί για φυματίωση και ασθενείς με φυματίωση. απονεμήθηκε obscheklin. μια δοκιμή αίματος με τον ορισμό του ESR, που περιέχει eterr. και λευχαιμία, συγκέντρωση αιμοσφαιρίνης και μέτρηση της λευκοκυτταρικής φόρμουλας. Οι ασθενείς με φυματίωση με την παρουσία της πυεμίας συνιστώνται. για τον προσδιορισμό του αριθμού των δικτυοκυττάρων για την αξιολόγηση των αναγεννημένων. την ικανότητα του μυελού των οστών, σε διαφορικές διαγνωστικές περιπτώσεις - την περιεκτικότητα των αιμοπεταλίων. Αλλαγές στον αιματολόγο. οι δείκτες εξαρτώνται, αφενός, από τον εντοπισμό, τη φύση και τη σοβαρότητα των inf. από την άλλη, από την κατάσταση του οργανισμού, από τα αντισταθμιστικά του αποθέματα. Χερόγραμμα. μάλλον μια φάση της διαδικασίας από την σφήνα της. σχήμα. Για παράδειγμα, σε ασθενείς με εκτεταμένες καταστροφικές μορφές φυματίωσης, με αποζημίωση για τη διαδικασία και απουσία φρέσκιας φλεγμονής. αλλαγές στο πρότυπο του αίματος μπορεί να είναι ο κανόνας. Εξάτμιση των σωλήνων. η διαδικασία συνοδεύεται συνήθως από μια μετατόπιση ουδετερόφιλων, τη λεμφοπενία και την αύξηση του ESR. Γενικά. αριθμός λευκών αιμοσφαιρίων. οι περισσότεροι ασθενείς βρίσκονται εντός των κανονικών ορίων. Μόνο οξεία και σοβαρή πορεία χαρακτηρίζεται από αύξηση της περιεκτικότητας των λευκοκυττάρων στο αίμα σε 15 x 109 / L Η ουδετερόφιλη μετατόπιση του τύπου λευκοκυττάρων προς τα αριστερά γίνεται πιο σημαντική. Με τη σοβαρότητα της νόσου (ειδικά με φυσαλιδώδη φυματίωση) μπορεί να εμφανιστεί λευχαιμοειδής αντίδραση μυελογενικού τύπου. Ο εγκλωβισμός της οξείας διαδικασίας προκαλεί ομαλοποίηση των υποδεικνυόμενων αλλαγών, εμφάνιση λεμφοκυττάρωσης. Ουδετεροπενία και λεμφοκύτταρα μπορεί να παρατηρηθεί σε χρόνια αιματογενώς διαδεδομένη και εστιακή φυματίωση.

Ανάλυση ούρων. Στην ανάλυση των ούρων στον ασθενή με πνευμονική φυματίωση, δεν υπάρχουν αξιοσημείωτες ανωμαλίες. Οι αλλαγές εμφανίζονται μόνο με φυματιώδεις αλλοιώσεις των νεφρών και του ουροποιητικού συστήματος. Μια ρουτίνα ανάλυση ούρων για τη φυματίωση είναι απαραίτητη όχι μόνο σε περίπτωση υποψίας για νεφρική βλάβη. Στο τελευταίο. αυτός είναι ο μόνος. για έγκαιρη διάγνωση. Η επίμονη παρουσία πύου στα ούρα και, το σημαντικότερο, η μαστίχα. τα βακτήρια, βέβαια, δείχνουν στον σωλήνα. νεφρικό. Ωστόσο, μερικές φορές απαιτείται. Εκδόθηκε. ούρα για την ανίχνευση ενός παθολόγου. ευρήματα; έτσι για μερικούς. μορφές φυματίωσης. Μελέτη ούρων μηνιαίως (διάχυτες μορφές, σύνθετο πρωτογενές σύμπλεγμα). Μικρές αλλαγές στα ούρα με τη μορφή ιχνών πρωτεΐνης, μονήρης. τα λευκοκύτταρα και τα φρέσκα ερυθροκύτταρα μπορούν να ανιχνευθούν περιοδικά ως φαινόμενο γενικής δηλητηρίασης. Τέλος, κάποιες αντιδράσεις με τα ούρα δίνουν μια ένδειξη της σοβαρότητας της διαδικασίας. Μεταξύ αυτών είναι η εμφάνιση της αντίδρασης διαστήματος σε γενικεύσεις. μορφές φυματίωσης, ειδικά με φυματίωση.

Αναμφισβήτητα, η προγνωστική αξία κατά τη διάρκεια της φυματίωσης έχει ουροχρωμογόνο δράση. Είναι πολύ απλό και αυτό είναι το μεγάλο του πλεονέκτημα. Έχει proizv. επόμενο. τρόπο: πάρτε τα φιλτραρισμένα ούρα και αραιώστε τα 10 φορές. Χύνεται σε δύο σωλήνες, ένα είναι ο έλεγχος και προστίθεται σε ένα άλλο διάλυμα υπερμαγγανικού καλίου 1: 1000. Εάν μια θετική απόκριση λαμβάνεται in vitro απότομη καναρινιών χρώσης η οποία αποκάλυψε πολύ σαφής όταν συγκρίνεται με τον έλεγχο. Είναι απαραίτητο να ληφθεί υπόψη μόνο καλά εκφρασμένη. χρωματισμό. Ο μηχανισμός αντίδρασης είναι ότι το υπερμαγγανικό κάλιο οξειδώνει το άχρωμο ουροχρωμογόνο στα ούρα, το οποίο είναι σημαντικά αυξημένο με προοδευτική φυματίωση.

Ποιες είναι οι εξετάσεις για πνευμονική φυματίωση;

loading...

Όλοι οι ασθενείς λαμβάνουν εργαστηριακές εξετάσεις. Επειδή η παθολογία είναι μεταδοτική σε άλλους, η έγκαιρη μελέτη του βιολογικού υλικού συμβάλλει στην ακρίβεια στη διάγνωση και βοηθά στην παρακολούθηση της πορείας της θεραπείας.

Ο κατάλογος των εργαστηριακών εξετάσεων για την πνευμονική φυματίωση

loading...

Κατάλογος δοκιμασιών για τη φυματίωση

Ο κατάλογος των υποχρεωτικών εξετάσεων για τη νόσο της φυματίωσης έχει ως εξής:

  • εξέταση των πτυέλων - παρουσία σπηλαίων, ρυζιού, πρωτεϊνών, ελαστικών ινών, αλάτων ασβεστίου.
  • ανάλυση εξιδρώματος - δείχνει ουδετερόφιλα και ενδοθηλιακά κύτταρα με κυριαρχία λευκοκυττάρων.
  • ανάλυση της βρογχοκυψελιδικής έκπλυσης παρουσιάζει μειωμένο αριθμό κυψελιδικών μακροφάγων με απότομη αύξηση των ουδετερόφιλων κατά την ενεργό πορεία της διαδικασίας φυματίωσης και στην ανενεργή ροή οι δείκτες μακροφάγων είναι ελαφρώς αυξημένοι.
  • ορολογικές δοκιμές, ή ενζυμική ανοσοδοκιμασία, λαμβάνονται για τον προσδιορισμό ανοσοσφαιρινών ορού για μυκοβακτηριακά αντιγόνα. Η αναλογία του διαγνωστικού τίτλου αντισωμάτων προς τον αιτιολογικό παράγοντα της νόσου υπερβαίνει την τιμή 1: 8.

Τι δείχνουν τα αποτελέσματα των εξετάσεων αίματος;

Χάρη στη βιοχημική ανάλυση του αίματος σε πνευμονική φυματίωση, οι ειδικοί έχουν την ευκαιρία να καθορίσουν και να κατευθύνουν τις αλλαγές στην πρωτεΐνη και τα κλάσματά της στον ορό του αίματος. Αυτό καθορίζει τη μορφή και το στάδιο της ασθένειας. Ελέγχονται τα επίπεδα ουρικού οξέος, χαλκού, χοληστερόλης και λυσοζύμης. Η δραστηριότητα της κινάσης της κρεατίνης και του ενζύμου μετατροπής της αγγειοτενσίνης παρατηρείται. Λόγω του χαμηλότερου ρΗ και του αυξημένου pCO2, αναπτύσσεται η αναπνευστική οξέωση.

Όσον αφορά τις παραμέτρους της αιμοσφαιρίνης, η μείωση τους, που οδηγεί στην ανάπτυξη αναιμίας, δεν είναι χαρακτηριστική για τη διαδικασία της φυματίωσης.

Η ανάλυση ούρων σε φυματικούς ασθενείς

Είναι η εξέταση ούρων για πνευμονική φυματίωση;

Η απέκκριση των ούρων σε ασθενείς με φυματίωση παραμένει κανονική. Παθολογικές αλλαγές συνήθως συμβαίνουν όταν οι νεφροί και οι ουροφόροι οδούς εμπλέκονται στη διαδικασία της φυματίωσης. Σε ασθενείς με χρόνια νόσο, κατά τη διάρκεια της μελέτης, μπορούν να ανιχνευθούν σημεία αμυλοείδωσης.

Τι δείχνει η ανάλυση των ούρων στην πνευμονική φυματίωση, ποιες πληροφορίες μπορούν να υποδηλώνουν την ανάπτυξη της παθολογικής διαδικασίας στο σώμα;

  1. Η πυκνότητα είναι 1.015 - 1.025.
  2. Μια ενιαία παρουσία ερυθρών αιμοσφαιρίων επιτρέπεται, στα παιδιά - όχι περισσότερο από 5.
  3. Τα λευκοκύτταρα δεν πρέπει να υπερβαίνουν τις 2 μονάδες, για τις γυναίκες και τα κορίτσια - μέχρι 5 μονάδες.
  4. Οι τιμές του αλατιού δεν πρέπει να είναι σημαντικές.
  5. Η επιτρεπόμενη τιμή ενός επίπεδου επιθηλίου είναι μέχρι 5 μονάδες.

Τι θα δείξει μια εξέταση αίματος για πνευμονική φυματίωση

loading...

Η φυματίωση είναι μια επικίνδυνη και πολύπλοκη ασθένεια στη θεραπεία. Η αποτελεσματικότητα της θεραπείας εξαρτάται από το πόσο έγκαιρη αποκαλύφθηκε. Κανείς δεν είναι άτρωτος από τη μόλυνση, απολύτως ο καθένας μπορεί να αρρωστήσει - ενήλικες, παιδιά, ηλικιωμένοι.

Ελλείψει της απαραίτητης έγκαιρης θεραπείας κλειστή μορφή πηγαίνει μέσα επικίνδυνο ανοικτό, Επομένως, η διάγνωση στα αρχικά στάδια της νόσου είναι εξαιρετικά σημαντική και αυτό μπορεί να επιτευχθεί με τακτικές και εμπεριστατωμένες έρευνες.

Σε αυτό το άρθρο, θα εξετάσουμε διάφορες μεθόδους για τη διάγνωση αυτής της πνευμονικής νόσου και επίσης θα προσπαθήσουμε να προσδιορίσουμε ποια εξέταση αίματος για πνευμονική φυματίωση είναι η πιο αξιόπιστη και ενημερωτική.

Όταν υπάρχει ανάγκη για έλεγχο της φυματίωσης

loading...

Έτσι, η έρευνα είναι απαραίτητη όταν:

  • επαφές με φορείς της νόσου.
  • γενική αδυναμία.
  • μείωση σωματικού βάρους ·
  • αύξηση της θερμοκρασίας το βράδυ.
  • χρόνιο βήχα.

Είναι ιδιαίτερα σημαντικό να προσδιορίζεται εγκαίρως η παρουσία φυματίωσης στην παιδική ηλικία, διότι είναι πολύ πιθανό στα παιδιά η μόλυνση να προκαλέσει περαιτέρω παθολογικές διεργασίες στο σώμα.

Σημαντικό! Ένα από τα προληπτικά μέτρα είναι ο εμβολιασμός με BCG στο 4 ημέρες ζωή παιδί και στο 7 ετών ηλικία. Το σώμα του παιδιού είναι ασθενέστερο από έναν ενήλικα, επομένως είναι σημαντικό να τον προστατεύσετε από τη μόλυνση και να εμβολιάσετε.

Μελέτες για υποψία φυματίωσης

loading...

Η φυματίωση μπορεί να εντοπιστεί με διάφορους τρόπους.


Φωτογραφία 1. Θραύσμα ακτινογραφίας στήθους ασθενούς με φυματίωση. Η φθοριογραφία είναι μια από τις πιο αξιόπιστες μεθόδους διάγνωσης αυτής της ασθένειας, αλλά είναι πιο αποτελεσματική σε ένα διαμέρισμα με άλλους. Για παράδειγμα, μια λεπτομερής εξέταση αίματος θα δείξει φυματίωση ακόμα και σε πρώιμο στάδιο.

  1. Ακτινογραφική εξέταση.Η αξιολόγηση του βαθμού βλάβης των πνευμόνων θα βοηθήσει στην φθορογραφία. Ωστόσο, πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι τα αρχικά στάδια της εξέλιξης της νόσου δεν θα είναι ορατά στην ακτινογραφία. Η εξέταση πρέπει να είναι πλήρης. Για μια πληρέστερη εξέταση, οι πνεύμονες του ασθενούς πρέπει να φωτογραφηθούν από μπροστά και από πίσω.
  2. Δοκιμασία φυματίωσης. Κατά την εξέταση των παιδιών, χρησιμοποιείται συχνότερα η δοκιμασία φυματίνης (αντίδραση Mantoux). Η φυματίωση είναι ένα μείγμα πρωτεϊνών που απομονώνονται από νεκρά παθογόνα. Η εισαγωγή του φαρμάκου κάτω από το δέρμα προκαλεί αντίδραση της ανοσίας, η οποία εκδηλώνεται με διαφορετικούς τρόπους. Εάν δεν υπάρχουν παθογόνα στο σώμα, τότε δύο μέρες μετά την ένεση θα υπάρχει ένα ελάχιστα ορατό ίχνος. Εάν ο τόπος έγχυσης του δείγματος ή ο σχηματισμός ενός έλκους φλεγμονή, η πιθανότητα μόλυνσης του ασθενούς είναι υψηλή.

Σημαντικό! Η αντίδραση Mantoux δεν καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της παρουσίας φυματίωσης με 100% πιθανότητα, αλλά θα βοηθήσει στον προσδιορισμό της ομάδας κινδύνου για τη νόσο. Με προσοχή, αξίζει να δοκιμάσετε αυτούς που υποφέρουν από αλλεργίες. Η εισαγωγή της σύνθεσης του σώματος μπορεί να ανταποκριθεί με έναν απρόβλεπτο τρόπο.

  1. Έρευναούρακαι το αίμα. Τα αποτελέσματα βοηθούν στην ανίχνευση ιχνών του παθογόνου παράγοντα. Ανατίθεται για να προσδιορίσει την τελική διάγνωση και την έκταση της νόσου.
  2. Σύνθεσηφλέγμα. Η παρουσία Mycobacterium tuberculosis επιτρέπει τον προσδιορισμό και τη μελέτη των πτυέλων. Το υλικό δείχνει μια περίσσεια του προτύπου της πρωτεΐνης, η οποία την διακρίνει από τα βρογχικά πτύελα, καθώς και τα παθογόνα της μόλυνσης.

Είναι δυνατόν να προσδιοριστεί η φυματίωση με μια γενική εξέταση αίματος

loading...

Σύνθεση ερυθροκύτταρα (ερυθρά αιμοσφαίρια) παρουσία βακτηριδίων ποικίλλει ασήμαντα. Οι οξείες εντερικές ή πνευμονικές αιμορραγίες προκαλούν αναιμία, σημαντικό μείωση της αιμοσφαιρίνης.

Υπάρχουν άνθρωποι που αμφιβάλλουν εάν η φυματίωση μπορεί να προσδιοριστεί με ανάλυση αίματος. Στην πραγματικότητα, μια γενική ανάλυση είναι σε θέση να εντοπίσει τις αναπτυσσόμενες φλεγμονώδεις και παθολογικές διεργασίες στο σώμα με αυξημένο ποσοστό ESR. Ο αυξημένος δείκτης υποδεικνύει όχι μόνο τη δραστηριότητα και τη διάρκεια της τρέχουσας φλεγμονής, αλλά και την επιδείνωση της χρόνιας, ιδιαίτερα στα τελικά στάδια της νόσου.


Φωτογραφία 2. Ο γιατρός εκτελεί τη διαδικασία συλλογής αίματος από τη φλέβα του ασθενούς χρησιμοποιώντας μια σύριγγα. Μετά από αυτό, θα γίνει μια εξέταση αίματος, με φυματίωση, οι δείκτες της οποίας θα υποδεικνύουν τις φλεγμονώδεις διεργασίες.

Σημαντικό! Το επίπεδο του ESR μπορεί να συγχέεται με τους δείκτες για τη φλεγμονή ή τον καρκίνο του πνεύμονα. Σε αυτή την περίπτωση είναι απαραίτητο να διερευνηθεί αριθμός ηωσινοφίλων (ένας από τους τύπους των λευκοκυττάρων). Εάν τα ηωσινόφιλα διευρυνθούν και ο τύπος των λευκοκυττάρων παρουσιάζει απότομες αλλαγές στη δοκιμασία αίματος, αυτό συμβαίνει με τη φυματίωση και αποκλείεται από την πνευμονία.

Είναι ακριβή τα κλινικά και βιοχημικά αιματολογικά τεστ;

Μια κλινική εξέταση αίματος για πνευμονική φυματίωση είναι συχνά ανεπαρκής για τη διάγνωση βακίλου του φυματιδίου. Στη συνέχεια, απαιτείται περαιτέρω διεξοδική εξέταση. Το ίδιο μπορεί να λεχθεί και για τη βιοχημική εξέταση αίματος. Με τη φυματίωση του αρχικού σταδίου ή της λανθάνουσας μορφής, ο ίδιος πιθανότατα δεν θα παρουσιάσει ανωμαλίες. Και μόνο με οξείες μορφές της νόσου ο συντελεστής λευκωματίνης-σφαιρίνης σε αυτό θα μειωθεί.

Τύποι εξετάσεων αίματος για αντισώματα κατά της φυματίωσης

loading...

Υπάρχουν πιο ακριβείς, βαθύτερες από τις μεθόδους ελέγχου αίματος, μεθόδους που επιτρέπουν τον εντοπισμό της φυματίωσης. Πώς να καθορίσετε με τέτοιες εξετάσεις αίματος, έχετε μια ασθένεια, θα εξετάσουμε περαιτέρω.

Ο καθορισμός αντικειμενικής διάγνωσης είναι δυνατός με τη χρήση προσεγγίσεων αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) και ανοσοπροσδιορισμού ενζύμου (ELISA).

Η ELISA δείχνει την παρουσία φυματίωσης

Με τη βοήθεια του ELISA αποκαλύπτει την παρουσία παθογόνων στον ασθενή. Η μέθοδος είναι βολική, καθώς επιτρέπει την ταυτόχρονη εξέταση ενός μεγάλου αριθμού δειγμάτων. Ωστόσο, έχει χαμηλή ευαισθησία και συνιστάται για χρήση σε περιοχές με χαμηλή συχνότητα εμφάνισης.

Τι αλλαγές αποκαλύπτει η μέθοδος PCR;

Μέθοδος PCR αναφέρεται στις πιο παραγωγικές. Χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της νόσου, τον προσδιορισμό της σοβαρότητας και της ύφεσης στη θεραπεία με την εύρεση του DNA των μικροβιακών.

Η PCR χρησιμοποιείται για:

  • ανίχνευση μιας προχωρημένης μαχαιρίσματος του Koch.
  • δοκιμή για την ανίχνευση της εξωπνευμονικής φυματίωσης.
  • ταχεία εγκαθίδρυση εστιών εντοπισμού λοίμωξης ·
  • διάγνωση της υποτροπής της νόσου.
  • παρακολούθηση της πορείας της θεραπείας.

Και αυτό και μια άλλη εξέταση αίματος για αντισώματα κατά της φυματίωσης θεωρούνται επαρκώς αξιόπιστα. Υπάρχουν όμως και άλλοι.

Εναλλακτικές μέθοδοι ανάλυσης αίματος

Λιγότερο από την PCR και τη ELISA είναι κοινή για την ανίχνευση της μεθόδου παθογόνων μικροβιακών Δοκιμασίες απελευθέρωσης ιντερφερόνης γ. Μπορεί να πραγματοποιηθεί αντί για δοκιμή φυματίνης. Η αντίδραση δείχνει τον σχηματισμό της γ-ιντερφερόνης σε απόκριση της εισαγωγής μικροβακτηρίων. Τα αποτελέσματα μπορούν να προσδιορίσουν με ακρίβεια την παρουσία λοίμωξης.

Μια άλλη εναλλακτική μέθοδος έρευνας είναι QuantiFERON-TB Gold. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται συχνότερα για τη δοκιμή παιδιών που έχουν σοβαρές αλλεργικές αντιδράσεις στη δοκιμασία φυματίωσης.

Σημαντικό! Και οι δύο μέθοδοι δεν επιτρέπουν να προσδιοριστεί ο βαθμός ανάπτυξης της λοίμωξης - ενεργός ή λανθάνων.

Ο θεράπων ιατρός καθορίζει τον τύπο του τεστ αίματος που θα χρησιμοποιηθεί. Συχνά, η μελέτη διεξάγεται με περίπλοκο τρόπο. Η ανάλυση ενός αίματος στην λανθάνουσα μορφή μιας φυματίωσης γενικά δεν μπορεί να δώσει αποτελέσματα.

Πώς αποκωδικοποιούνται τα αποτελέσματα των εξετάσεων αίματος;

loading...

Κατά την ερμηνεία μιας γενικής ανάλυσης αίματος, αξίζει να δοθεί προσοχή στο επίπεδο της ESR, της αιμοσφαιρίνης, των λευκοκυττάρων.

Επίπεδο ESR ένα υγιές άτομο θα έχει λιγότερο από 50 μονάδες, η περίσσεια αυτού του δείκτη υποδεικνύει μια φλεγμονώδη διαδικασία στο σώμα.

Αριθμός λευκοκυττάρων στο αίμα ασθενή με φυματίωση φτάνει 6 σε 10 9 / λίτρο, σε οξείες και σοβαρές περιπτώσεις της νόσου - 12-15 έως 10 9 / L.

Η σύνθεση των ερυθρών αιμοσφαιρίων οι περισσότεροι ασθενείς παραμένουν φυσιολογικοί. Η χαμηλή αιμοσφαιρίνη είναι σταθερή με εκατομμύρια φυματίωση, καζεϊνική πνευμονία.

Οξεία, προοδευτική και περίπλοκη μορφή της αλλαγής της νόσου leukogram. Σε ορισμένες περιπτώσεις, μέτρια λευκοκυττάρωσηέως 10.000-15.000 λευκά αιμοσφαίρια), λιγότερο συχνά λευκοπενία.

Όποια και αν είναι η εξέταση αίματος για πνευμονική φυματίωση, η αποκρυπτογράφηση τους είναι έργο έμπειρων εμπειρογνωμόνων. Μόνο αυτοί μπορούν να προσδιορίσουν με ακρίβεια πόσο φυματίωση προκαλείται, αν βρεθεί. Οι αναλύσεις ELISA και PCR αποκρυπτογραφούνται το ίδιο. Σε ειδικές μορφές, ένα αρνητικό ή θετικό αποτέλεσμα εμφανίζεται απέναντι από τη λοίμωξη που εντοπίστηκε.

Τύποι προσδιορισμών για θεραπεία

loading...

Η δυσκολία της θεραπείας είναι ότι η λοίμωξη μπορεί να γίνει βιώσιμη σε οποιοδήποτε είδος αντιβιοτικών, ειδικά σε προχωρημένα στάδια, καθώς και σε μακροχρόνια βάση περίοδο επώασης, κατά την οποία δεν είναι δυνατόν να προσδιοριστεί η μόλυνση.

Μετά τον εντοπισμό και τη συνταγογράφηση της κατάλληλης θεραπείας, η διαδικασία αποκατάστασης παρακολουθείται σε τακτά χρονικά διαστήματα 1-2 φορές το μήνα. Ο ασθενής δίνει αίμα και φλέγμα.


Φωτογραφία 3. Ιατρικό τραπέζι στο ιατρείο μετά τη συλλογή των πτυέλων από τον ασθενή. Δείγματα πτυέλων περικλείονται σε πλαστικούς δοκιμαστικούς σωλήνες και περιμένουν εργαστηριακές δοκιμές.

Μια γενική εξέταση αίματος, η δοκιμασία Mantoux, η φθοριογραφία μπορεί να γίνει σε σχεδόν οποιοδήποτε ιατρικό κέντρο, αυτό γίνεται αμέσως αν παρουσιαστεί καχυποψία. Βάσει των ευρημάτων, ο θεραπευτής θα κάνει ένα συμπέρασμα για την απουσία παθολογικές αλλαγές στο σώμα ή να δώσει οδηγίες για περαιτέρω εξέταση στο φαρμακείο της φυματίωσης.

Εξειδικευμένες και πιο ακριβείς μελέτες διεξάγονται στο Διανομείς φυματίωσης, τα οποία είναι εξοπλισμένα με εργαστήρια και τα απαραίτητα αντιδραστήρια για έρευνα.

Έτσι, συνοψίζοντας τα παραπάνω:

  • φυματίωση μια επικίνδυνη ασθένεια, η οποία είναι εξαιρετικά σημαντική για την έγκαιρη ανίχνευση.
  • αύξηση του ESR, διακοπή ρεύματος, αλλαγή στο leukogram να δοθεί η βάση για την αποστολή του ασθενούς για περαιτέρω εξέταση για τον εντοπισμό της λοίμωξης ·
  • η θεραπεία πραγματοποιείται με τη βοήθεια του αντιβηχικά φάρμακα. Η εντατική φάση της θεραπείας συνεχίζεται μέχρι να επιτευχθεί η θετική δυναμική των κλινικών και ακτινολογικών δεικτών.

Χρήσιμο βίντεο

loading...

Σας προσφέρουμε να παρακολουθήσετε ένα βίντεο, το οποίο απαντά επίσης στο ερώτημα αν είναι δυνατόν να προσδιοριστεί η φυματίωση με ανάλυση αίματος. Αναφέρει λεπτομερώς τον ποσοτικό τεστ QuantiFERON TB Gold, ο οποίος δείχνει τη φυματίωση στη δοκιμή αίματος για ανοσοαπόκριση.

Αποκωδικοποίηση της γενικής ανάλυσης αίματος για φυματίωση σε ενήλικες και παιδιά

loading...

Η μόλυνση με βακίλο του φυματιδίου δεν αποτελεί πλέον ποινή για ένα άτομο. Η σύγχρονη ιατρική χρησιμοποιεί αποτελεσματικά εργαλεία για την καταπολέμηση αυτής της νόσου, αν εντοπιστεί σε πρώιμο στάδιο. Με την πάροδο του χρόνου για την ανίχνευση της παθολογίας βοηθούνται τακτικές προληπτικές εξετάσεις και εξετάσεις, συμπεριλαμβανομένης γενικής αιματολογικής δοκιμής για τη φυματίωση.

Αλλαγή της κλινικής εικόνας

Η συνολική εξέταση αίματος για πνευμονική φυματίωση (UAC) δεν έχει συγκεκριμένες εκδηλώσεις. Οι δείκτες που μιλούν για την εξέλιξη της φυματίωσης και ο προσδιορισμός του σταδίου της νόσου δεν υπάρχουν. Αλλά για μη συγκεκριμένα συμπτώματα, μπορεί κανείς να κρίνει μια κρυμμένη φλεγμονώδη διαδικασία και να υποπτεύεται αλλαγές στους πνεύμονες.

Απόκλιση των ερυθροκυττάρων από το φυσιολογικό

Με μια αργή μορφή ή με μια εντοπισμένη αλλοίωση, ο αριθμός των ερυθρών αιμοσφαιρίων στο αίμα δεν αλλάζει, αλλά το χρώμα τους αλλάζει. Το επίπεδο της αιμοσφαιρίνης στο ερυθροκύτταρο μειώνεται. Αυτή η κατάσταση ονομάζεται υποχλωρία.

Με σημαντικές διηθητικές βλάβες του πνευμονικού ιστού, μια κλινική εξέταση αίματος δείχνει μείωση του αριθμού των ερυθρών αιμοσφαιρίων, μείωση του μεγέθους τους. Εμφανίζονται ανώριμα κύτταρα - δικτυοερυθροκύτταρα, τα οποία είναι "πρόδρομοι" ερυθρών αιμοσφαιρίων. Στο αρχικό στάδιο της φυματίωσης, η ποσότητα των δικτυοερυθροκυττάρων δεν υπερβαίνει το 0,5%.

Η σοβαρή αναιμία είναι συχνότερη στους ενήλικες με προχωρημένη μορφή φυματίωσης. Σε αυτή την περίπτωση, ο αριθμός των δικτυοερυθροκυττάρων αυξάνεται στο 1% του συνολικού αριθμού των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Μετατόπιση της λευκοκυτταρικής φόρμουλας

Τα λευκοκύτταρα ως κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος εμπλέκονται στην ανταπόκριση στην ασθένεια στην πρώτη θέση. Η γενική ανάλυση του αίματος και η μελέτη των λευκογραφιών καθορίζουν τόσο την παρουσία της φλεγμονώδους διαδικασίας όσο και τη φάση της.

Σε απλή κλειστή μορφή, παρατηρείται σημαντική αύξηση του αριθμού των ουδετεροφίλων - των λευκών αιμοσφαιρίων που είναι υπεύθυνα για την καταπολέμηση της βακτηριακής λοίμωξης. Εμφανίζονται προμυελοκύτταρα - ανώριμα κύτταρα λευκοκυττάρων, τα οποία κανονικά δεν εμφανίζονται.

Παρατεταμένη, σοβαρή, πνευμονική φυματίωση συνοδεύεται από εκφυλιστικές μεταβολές στα ουδετερόφιλα, τον σχηματισμό παθολογικής κοκκινότητας. Ο αριθμός των ηωσινοφίλων μειώνεται απότομα. Παρατηρείται λεμφοπενία - μείωση του αριθμού των λεμφοκυττάρων. Όλα αυτά τα σημάδια δείχνουν παρατεταμένη φλεγμονώδη διαδικασία, συνοδευόμενη από το σχηματισμό πύων και νεκρωτικών μαζών.

Αλλαγή στο ESR

Για τον προσδιορισμό της φυματίωσης στην ενεργό φάση της βοηθάει στην ESR - δείκτη του ρυθμού καθίζησης των ερυθροκυττάρων. Το βάρος των ερυθρών αιμοσφαιρίων και η ταχεία κατακρήμνισή τους διευκολύνεται από την πρόσφυση των ανοσοσφαιρινών, του ινωδογόνου. Κανονικά, αυτά τα επίπεδα αίματος στους άνδρες δεν υπερβαίνουν τα 10 mm / h, στις γυναίκες - 15 mm / h. Η επιτάχυνση του ESR έως 80 mm / h δείχνει την ενεργοποίηση της φλεγμονώδους διαδικασίας στο σώμα.

Χαρακτηριστικά των δεικτών στα παιδιά

Η ανάλυση του αίματος για φυματίωση σε ένα παιδί δεν διαφέρει πολύ από τις αλλαγές στον ενήλικα. Η αποκωδικοποίηση του αποτελέσματος γίνεται για τους ίδιους δείκτες:

  • Στην αρχική φάση της νόσου, ο τύπος ερυθροκυττάρων αλλάζει ασήμαντα. Η αναιμία μπορεί να ανιχνευθεί μόνο όταν η φόρμα είναι καταστροφική. Σε άλλες περιπτώσεις, ο αριθμός των ερυθρών αιμοσφαιρίων παραμένει αμετάβλητος, ενώ το ποσοστό των ανώριμων ερυθροκυττάρων αυξάνεται. Μπορεί να υπάρχει υποψία φυματίωσης σε παιδιά αν ανιχνευθεί δικτυοερυθροκύτταρο πάνω από 1 ppm.
  • Οι δείκτες λευκοκυττάρων υποβάλλονται επίσης σε αλλαγές. Αναπτύσσει λευκοκυττάρωση - αύξηση του συνολικού αριθμού των λευκών αιμοσφαιρίων λόγω ουδετερόφιλων και ο αριθμός των λεμφοκυττάρων μειώνεται σημαντικά. Σε έναν κανόνα για παιδιά άνω των 6 ετών 40%, ο αριθμός των λεμφοκυττάρων στη φυματίωση δεν υπερβαίνει το 20%.

Στα αρχικά στάδια της νόσου αυξάνεται ο αριθμός των ηωσινοφίλων-κυττάρων που αντιδρούν στην εμφάνιση μιας αλλεργικής αντίδρασης. Μια απότομη μείωση δείχνει ότι η διαδικασία περνάει στην ενεργή φάση.

  • Στην παιδική ηλικία, το ESR δεν υπερβαίνει τα 10 mm / h. Η επιτάχυνση στα 50mm / h δείχνει την κινητοποίηση των αμυντικών του σώματος για την καταπολέμηση της φλεγμονώδους διαδικασίας.

Στο παιδί το αρχικό στάδιο της νόσου εκτελείται συχνά χωρίς εμφανή συμπτώματα ή μεταμφιέσεις υπό ARVI.

Αλλαγές ανάλογα με το στάδιο της νόσου

Είναι δυνατόν να διαπιστωθεί η παρουσία εστίας φυματίωσης με τη βοήθεια εργαστηριακού τεστ αίματος; Δυστυχώς όχι. Μια γενική εξέταση αίματος για φυματίωση είναι ικανή να ανιχνεύσει τη φλεγμονώδη διαδικασία μόνο σε ορισμένα στάδια της νόσου.

  1. Στο στάδιο της διήθησης, τα λευκοκύτταρα αντιδρούν ελαφρώς, το ESR αυξάνεται.
  2. Στο στάδιο αποσύνθεσης παρατηρούνται σημαντικές αλλαγές στη λευκοκυτταρική φόρμουλα και στα ερυθροκύτταρα.
  3. Η διαδομένη μορφή κατά τη διάρκεια της ανάλυσης θα δώσει πιο έντονες προαναφερθείσες αποκλίσεις.
  4. Όταν η φλεγμονώδης διαδικασία μετριάζεται ή ανακάμψει, το ερυθρό αίμα επανέρχεται στο φυσιολογικό, ο αριθμός και η αναλογία των λευκοκυττάρων αποκαθίστανται.
  5. Δεν ανιχνεύεται ανενεργή μορφή πνευμονικής φυματίωσης στη γενική εξέταση αίματος.

Το κλειδί για την επιτυχή θεραπεία είναι η έγκαιρη ανίχνευση της φυματίωσης και μια γενική εξέταση αίματος είναι μια μέθοδος που επιτρέπει την έγκαιρη ανίχνευση της έναρξης μιας λανθάνουσας φλεγμονώδους διαδικασίας. Και αν και η ανάλυση δεν θεωρείται εξειδικευμένη μέθοδος έρευνας, μπορεί σε σύντομο χρονικό διάστημα να καλύψει μια μεγάλη μάζα ανθρώπων. Όταν εντοπίζονται ανωμαλίες σε μια τυπική κλινική εικόνα, εκχωρείται ειδική ανάλυση για τη φυματίωση και τη φθοριογραφία.

Ποιος δήλωσε ότι είναι αδύνατο να θεραπευθεί η φυματίωση;

Έχετε διαγνωστεί με φυματίωση. Πληρώνετε όλες τις συνταγές του γιατρού, αλλά δεν υπάρχει ανάκαμψη. Από τη χούφτα των χαπιών το στομάχι πονάει, επιδιώκει αδυναμία και απάθεια; Ίσως ήρθε η ώρα να αλλάξετε την προσέγγισή σας στη θεραπεία.

Οι γιατροί δεν μπορούν να ξεπεράσουν τη βασική αιτία της ασθένειάς σας. Διαβάστε την ιστορία της Ελένας, η οποία κατάφερε να νικήσει τη φυματίωση ανεξάρτητα από το τι. Διαβάστε το άρθρο >>

Δείκτες ΕΑΥ στη φυματίωση

Επί του παρόντος, σύμφωνα με τα στατιστικά στοιχεία, η φυματίωση είναι η πιο κοινή ασθένεια μεταξύ των ανθρώπων. Τις περισσότερες φορές αυτή η ασθένεια επηρεάζει τα παιδιά και τα τμήματα του πληθυσμού με χαμηλό εισόδημα. Αξίζει να σημειωθεί ότι κάθε χρόνο το ποσοστό των ασθενών διπλασιάζεται. Σε σχέση με αυτό, αναπτύσσονται νέα φάρμακα και μέθοδοι για τη θεραπεία της φυματίωσης.

Ο κύριος παράγοντας που συμβάλλει στην ανάπτυξη της φυματίωσης είναι η μείωση της ασυλίας, η οποία μπορεί να προκληθεί από τη ρύπανση του περιβάλλοντος. Η διάγνωση αυτής της ασθένειας μπορεί να γίνει με τη βοήθεια δοκιμών και με πολλούς άλλους τρόπους.

Η ανάλυση του αίματος για τη φυματίωση είναι ο κύριος δείκτης για τον προσδιορισμό της νόσου στον άνθρωπο. Η φυματίωση είναι μια επικίνδυνη μολυσματική ασθένεια. Αξίζει να σημειωθεί ότι σε ένα περισσότερο παραμελημένο στάδιο η ασθένεια είναι πολύ δύσκολο να αντιμετωπιστεί, γι 'αυτό είναι πολύ σημαντικό να παρατηρήσουμε την ασθένεια εγκαίρως και να αρχίσουμε την κατάλληλη θεραπεία στο νοσοκομείο.

Τρόποι συρρίκνωσης της φυματίωσης

Η ασθένεια έχει μηχανισμό μετάδοσης σταγονιδίων αέρα. Έτσι, η μόλυνση μπορεί να συμβεί ως αποτέλεσμα του να πάρει το παθογόνο στο σώμα μέσω της βλεννογόνου μεμβράνης. Επιπλέον, η φυματίωση μπορεί να μεταδοθεί από άρρωστη μητέρα σε αναπτυσσόμενο έμβρυο.

Σε όλες σχεδόν τις περιπτώσεις, η φυματίωση δρα στο αναπνευστικό σύστημα. Διαχωρίστε την εξωπνευμονική μορφή της νόσου (επηρεάζει το πεπτικό σύστημα, το κεντρικό νευρικό σύστημα, διακόπτει την οπτική λειτουργία, τις αρθρώσεις, το ουρογεννητικό σύστημα).

Η κύρια πηγή της νόσου είναι το μυκοβακτηρίδιο - το ραβδί του Koch. Επηρεάζει τους πνεύμονες, το δέρμα, τα οστά και πολλά άλλα όργανα. Κατά κανόνα, η φυματίωση μπορεί να οδηγήσει σε αναπηρία ή ακόμα και στο θάνατο ενός ατόμου. Ωστόσο, εάν η νόσος διαγνωστεί όσο το δυνατόν νωρίτερα, τότε είναι αρκετά επιδεκτική θεραπείας.

Δείκτες ΕΑΥ στη φυματίωση

Μια εξέταση αίματος για τον ορισμό της φυματίωσης δείχνει την κλινική πορεία της φλεγμονώδους διαδικασίας. Κανονικά, ο ρυθμός καθίζησης των ερυθροκυττάρων είναι: στους άνδρες 1-10 mm / h, στις γυναίκες 2-15 mm / h.

Ο αιτιολογικός παράγοντας, που εισέρχεται στο ανθρώπινο σώμα, προκαλεί βλάβη στους ιστούς και τα όργανα διαφόρων συστημάτων. Συμπεριλαμβανομένων των μεταβαλλόμενων δεικτών αίματος. Έτσι, όταν μολυνθεί με ένα ραβδί, παρατηρείται πολύ ισχυρή αύξηση του ποσοστού καθίζησης των ερυθροκυττάρων. Επίσης, ο αριθμός των λευκών αιμοσφαιρίων αυξάνεται, επειδή η φλεγμονώδης διαδικασία λαμβάνει χώρα στο σώμα.
Κατά κανόνα, η φυματίωση δεν προκαλεί σημαντικές αλλαγές στα ερυθροκύτταρα. Η ανάπτυξη μικρής αναιμίας και χαμηλής αιμοσφαιρίνης μπορεί να αναπτυχθεί μόνο με σημαντική απώλεια αίματος. Έτσι, η φυματίωση συνοδεύεται από υπέρβαση του ESR πολύ υψηλότερη από την κανονική αξία.

Συμπτώματα

Τα κύρια συμπτώματα της φυματίωσης περιλαμβάνουν:

  1. Αυξημένη θερμοκρασία σώματος.
  2. Νυχτερινοί ιδρώτες
  3. Η εμφάνιση δυσκολίας στην αναπνοή.
  4. Ξηρός, έντονος βήχας με πτυέλα (μπορεί να υπάρχουν και ραβδώσεις αίματος).
  5. Γενική κόπωση.
  6. Ξαφνική απώλεια βάρους.
  7. Ταχεία κόπωση.
  8. Λήθαργος;
  9. Επιθετικότητα;
  10. Έλλειψη όρεξης.
  11. Πόνος στο στήθος.

Τα παιδιά, σε αντίθεση με τους ενήλικες, είναι πιο ευαίσθητα στη μόλυνση από τη φυματίωση. Επομένως, είναι απαραίτητο να εξετάζετε τακτικά το παιδί σας και να διεξάγετε μια δοκιμή για να εντοπίσετε τη ράβδο του Koch. Η έγκαιρη διάγνωση επιτρέπει την επίτευξη θετικού αποτελέσματος χωρίς σοβαρές συνέπειες.

Μερικοί άνθρωποι έχουν ισχυρό ανοσοποιητικό σύστημα. Στην περίπτωση αυτή, τα συμπτώματα της νόσου αρχίζουν να εμφανίζονται μόνο στα τελευταία στάδια. Με εξασθενημένη ανοσία, τα σημάδια εμφανίζονται στην αρχή της νόσου.
Η φυματίωση αναπτύσσεται αργά και σταδιακά:

  • Πρωτογενής μορφή.
    Αναπτύσσεται αμέσως μετά τη μόλυνση. Τα κύρια συμπτώματα σε αυτό το στάδιο είναι η διεύρυνση των λεμφαδένων.
  • Λανθάνουσα (κρυφή μορφή).
    Η εμφάνιση της νόσου χαρακτηρίζεται από την απουσία συμπτωμάτων. Επιπλέον εμφανίζονται με τη μορφή ειδικών πόνων κατά την αναπνοή και βήχα, έλλειψη όρεξης, υπερβολική εφίδρωση, γρήγορη κόπωση. Μια τέτοια μορφή μπορεί να θεωρηθεί μη μεταδοτική.
  • Ανοιχτή φόρμα.
    Η πιο σοβαρή μορφή της νόσου. Για τη θεραπεία, είναι απαραίτητο να προστατευθεί ο άρρωστος από τους άλλους σε κλειστά ιατρικά ιδρύματα. Αυτό είναι απαραίτητο για να διασφαλιστεί η ασφάλεια των γύρω ανθρώπων.
  • Δευτερεύουσα μορφή.
    Παρατηρείται ως αποτέλεσμα επαναλαμβανόμενης μόλυνσης.

Διάγνωση της φυματίωσης

Η ανίχνευση της νόσου είναι περίπλοκη λόγω της ομοιότητας των πρώτων συμπτωμάτων με χρόνια βρογχίτιδα. Ο πρωταγωνιστικός ρόλος στη διάγνωση της φυματίωσης διαδραματίζει η έγκαιρη λήψη δοκιμασιών από υποψήφιους ασθενείς. Επομένως, αν ένας ασθενής είναι ύποπτος για φυματίωση, πραγματοποιείται εξέταση πτυέλων. Για να γίνει αυτό, τα πτύελα συλλέγονται κατά τη διάρκεια της ημέρας και αποστέλλονται στο εργαστήριο για την ανίχνευση μυκοβακτηρίων.

Αξίζει να σημειωθεί ότι η διάγνωση της φυματίωσης έχει άλλες μεθόδους για την εξέταση των ασθενών.

Οι πιο αποτελεσματικοί τρόποι διάγνωσης μιας νόσου είναι οι εξής:

  1. B / x εξέταση αίματος.
  2. Ανάλυση ούρων.
  3. Ανάλυση πτυέλων.
  4. Mantoux test, Pirke.
  5. CT σάρωση (υπολογιστική τομογραφία).
  6. Ορολογική εξέταση αίματος (ELISA, PCR).
  7. Βρογχοσκόπηση;
  8. Βιοψία.
  9. Υπέρυθρη παρακέντηση.
  10. Φθοριογραφία.
  11. Φθοροσκόπηση.

Πρέπει να σημειωθεί ότι η φυματίωση συνοδεύεται από αύξηση της συγκέντρωσης χοληστερόλης, λυσοζύμης, ουρικού οξέος και Cu στον ορό. Σε αυτή τη βάση, όλες οι αλλαγές στη φυματίωση μπορεί να είναι πολύ συγκεκριμένες.

Κάθε μορφή της νόσου χαρακτηρίζεται από ροή, σοβαρότητα, διάγνωση και θεραπεία. Επομένως, όταν εμφανίζονται τα πρώτα συμπτώματα, θα πρέπει να συμβουλευτείτε αμέσως έναν γιατρό και να μην κάνετε αυτοθεραπεία. Δεδομένου ότι μπορείτε μόνο να επιδεινώσετε την κατάσταση και να επιδεινώσετε την κατάστασή σας.

Επί του παρόντος, υπάρχουν πολλά φάρμακα που καταπολεμούν αποτελεσματικά τον αιτιολογικό παράγοντα της φυματίωσης. Ο ηγετικός ρόλος στην αποκατάσταση ενός ατόμου διαδραματίζεται με την έγκαιρη διάγνωση και την κατάλληλη θεραπεία. Επίσης, η γενική κατάσταση του ασθενούς εξαρτάται από τη διαδικασία αποκατάστασης μετά την ασθένεια. Έτσι, εάν παρατηρηθούν όλες οι ιατρικές συστάσεις, ο κίνδυνος επανεμφάνισης μπορεί να μειωθεί.

Εργαστηριακή διάγνωση της φυματίωσης

Η φυματίωση είναι μια ασθένεια που είναι εύκολη στη διάγνωση σε σύγχρονες συνθήκες και επιστημονικά επιτεύγματα. Η εργαστηριακή διάγνωση της φυματίωσης είναι κεντρική σε άλλες διαγνωστικές μεθόδους, δεύτερη μόνο στις μεθόδους έρευνας με ακτίνες Χ.

Κλινική εξέταση αίματος

Ασθενείς με αλλαγές φυματίωση στη γενική ανάλυση αίματος δεν είναι παθογνωμονικό. Με περιορισμένες και ανενεργές μορφές της φυματίωσης υποχρωμία χαρακτηριστικό των ερυθροκυττάρων σε φυσιολογικό ποσότητά τους. Όταν μαζική διηθήσεων ή τυρώδης πνευμονίας, ενώ επικράτηση της τυρώδη λεμφαδενίτιδα, συγκεκριμένες εντερικές βλάβες, καθώς και για τις μεγάλες πνευμονική ή μετεγχειρητική αιμορραγία και σημείωση erythropenia microcytosis, oligohromaziyu, polihromaziyu. Μακροκυττάρωση, και ακόμα περισσότερο ποικιλοκυττάρωση πολύ πιο σπάνια, συνήθως με σοβαρή αναιμία. Αριθμός δικτυοερυθροκυττάρων στο βήμα φυματίωση αντισταθμίζεται κυμαίνεται από 0,1 έως 0,6%, με subcompensated - Από 0,6 έως 1,0% και 1% χαρακτηρίζεται από μη αντιρροπούμενη δικτυοερυθροκύτταρα.

Όταν φυματίωσης σε ορισμένες περιπτώσεις μπορεί να υπάρχει μια μέτρια λευκοκυττάρωση (μέχρι και 15 χιλιάδες των λευκοκυττάρων.), Λιγότερο ακτινοβολίας, οι οποίες συμβαίνουν σε 2-7% των ασθενών με περιορισμένη και εύκολη μορφές διαδικασία που συμβαίνουν και σε 12.5% ​​- από καταστρεπτικές και προοδευτική πνευμονική φυματίωση.

Οι συχνότερες μετατοπίσεις συμβαίνουν στον τύπο των λευκοκυττάρων. Σημείωση τόσο σχετική και απόλυτη neytrofiloz, μέτρια στροφή προς τα αριστερά μέχρι προμυελοκύτταρα λευκοκυττάρων. Τα μυελοκύτταρα είναι πολύ σπάνια στην περίπτωση της απλής φυματίωσης. Η αύξηση του αριθμού των ουδετερόφιλων με ανώμαλη δημητριακών σε ασθενείς με φυματίωση haemogram δείχνει πάντα τη διάρκεια της διαδικασίας: σε ασθενείς με σοβαρή φυματίωση σχεδόν όλα τα ουδετερόφιλα περιέχουν ανώμαλη σιτηρών. Όταν σταματήσει η εκδήλωση του φυματιώδους πυρετού, η μετατόπιση της πυρηνικής ενέργειας προσεγγίζει συγκριτικά γρήγορα κανονικά. Η παθολογική κοκκιότητα των ουδετεροφίλων συνήθως παραμένει περισσότερο από άλλες μεταβολές της αιμόγραμμα.

Η περιεκτικότητα των ηωσινοφίλων στο περιφερικό αίμα ποικίλει επίσης ανάλογα με τη φάση της διαδικασίας και την αλλεργική κατάσταση του οργανισμού. Ο αριθμός τους μειώνεται μέχρι aneozinofiliya σε σοβαρή και παρατεταμένη ξέσπασμα της νόσου και, αντιστρόφως, αυξάνει καθώς οι διηθήσεις επαναρρόφηση και πλευριτικό εξίδρωμα, καθώς και πρώιμες μορφές της πρωτογενούς φυματίωσης.

Οι περισσότερες μορφές πρωτοπαθούς φυματίωσης συνοδεύονται από λεμφοπενία, η οποία παρατηρείται μερικές φορές για αρκετά χρόνια, ακόμη και μετά από ουλές συγκεκριμένων αλλαγών. Η δευτερογενής φυματίωση στη φάση της παροξύνωσης, ανάλογα με τη σοβαρότητα της διαδικασίας, μπορεί να συνοδεύεται είτε από έναν κανονικό αριθμό λεμφοκυττάρων, είτε από λεμφοπενία.

Καταλαμβάνει μια ιδιαίτερη θέση προσδιορισμού ταχύτητα καθίζησης ερυθρών Επιπρόσθετες δοκιμές για την αξιολόγηση φυματιώδους διαδικασία (ESR) έχει μια τιμή στην αξιολόγηση της διαδικασίας φυματίωσης ροής και τον εντοπισμό ενεργές μορφές του. Αύξηση ESR δείχνει την παρουσία της παθολογικής διαδικασίας (λοιμώδεις-φλεγμονώδεις, πυώδης σηπτική, αιμοβλάστωση, Hodgkin et αϊ.) Και είναι ενδεικτική της σοβαρότητας της, αλλά φυσιολογικά επίπεδα όχι ESR πάντα δείχνουν την απουσία παθολογικής κατάστασης. Επιτάχυνση της καθίζησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων συμβάλλουν στην αύξηση των επιπέδων στο αίμα των σφαιρίνες, το ινωδογόνο, χοληστερόλη, και να μειώσει το ιξώδες του αίματος. Αργή χαρακτηριστικό καθίζησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων των συνθηκών συνοδεύεται αιμοσυμπύκνωση, αυξάνοντας το περιεχόμενο των αλβουμίνη και χολικά οξέα.

Η αιμόγραμμα σε ασθενείς με φυματίωση αλλάζει κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Οι αιματολογικές μετατοπίσεις εξαφανίζονται όσο πιο γρήγορα γίνεται, τόσο πιο επιτυχημένη είναι η θεραπευτική παρέμβαση. Ωστόσο, πρέπει να ληφθεί υπόψη η επίδραση της αιμοποίησης σε διάφορα αντιβακτηριακά φάρμακα. Συχνά προκαλούν ηωσινοφιλία, σε ορισμένες περιπτώσεις - λευκοκυττάρωση, λευκοπενία και συχνά έως και ακοκκιοκυτταραιμία και λεμφικό δικτυωτό αντίδραση. Συστηματική ελέγχου αιματολογίας και σωστή ανάλυση των δεδομένων είναι ουσιαστικής σημασίας για την αξιολόγηση της κλινικής κατάστασης του ασθενούς, και η αποτελεσματικότητα της δυναμικής διαδικασίας που εφαρμόζεται θεραπεία.

Κλινική ανάλυση ούρων

Με τη φυματίωση του ουροποιητικού συστήματος, η ανάλυση ούρων είναι η κύρια εργαστηριακή διαγνωστική μέθοδος. Μπορείτε να παρατηρήσετε τη λευκοκυτταρία, την ερυθροκυτταρία, την πρωτεϊνουρία, την υστεοσυνουρία, το μυκοβακτηρίδιο της φυματίωσης, τη μη ειδική βακτηριουρία.

Λευκοκυττουρία - το πιο κοινό σύμπτωμα της φυματίωσης του ουροποιητικού συστήματος πριν από τη χημειοθεραπεία και δεν υπάρχει συγκεκριμένη μόνο σε εξαιρετικές περιπτώσεις, όπως πλήρης εξάλειψη του αυλού του ουρητήρα. δοκιμή Nechyporenko (καθορισμός του αριθμού των λευκοκυττάρων σε 1 ml ούρων) βοηθά να αξιολογήσει πιο αντικειμενικά την nefrotuberkuloze βαθμό Πυουρία με, και σε ορισμένες περιπτώσεις για να το εντοπίσει σε κανονική ανάλυση ούρων. Ωστόσο, πρέπει να θυμόμαστε ότι leykotsitouriya μπορεί να είναι οξεία και χρόνια πυελονεφρίτιδα, κυστίτιδα, ουρηθρίτιδα, πέτρες στα νεφρά και ουρητήρων.

Ερυθροκυτταρία. καθώς και λευκοκυτταρία. θεωρούνται ένα από τα συχνότερα εργαστηριακά σημάδια της φυματίωσης του ουρογεννητικού συστήματος. Η συχνότητα της αιματουρίας εξαρτάται από την επικράτηση της διαδικασίας, αυξάνεται καθώς αναπτύσσεται η καταστροφική φυματίωση στα νεφρά. Η ερυθροκυτταρία χωρίς λευκοκυτταρία είναι πιο χαρακτηριστική για τα πρώιμα στάδια της φυματίωσης των νεφρών. Η αιματουρία, η οποία υπερισχύει της λευκοκυτταρίας, είναι ένα σημαντικό επιχείρημα υπέρ της φυματίωσης των νεφρών στη διαφοροποίησή της με τη μη ειδική πυελονεφρίτιδα.

Βιοχημική εξέταση αίματος

Με τη φυματίωση, οι αλλαγές σε ορισμένες βιοχημικές παραμέτρους εξαρτώνται κυρίως από τη φάση της διαδικασίας, τις επιπλοκές και τις διάφορες συνακόλουθες ασθένειες. Σε ασθενείς με αδρανή φυματίωση των πνευμόνων και άλλων οργάνων, τα ολικά πρωτεϊνικά και πρωτεϊνικά κλάσματα του ορού αίματος παραμένουν αμετάβλητα και καθορίζουν την κανονική τους περιεκτικότητα.

Στις οξείες μορφές της νόσου, καθώς και με την επιδείνωση και την πρόοδο των χρόνιων μορφών φυματίωσης, ο συντελεστής λευκωματίνης-σφαιρίνης μειώνεται.

Essential κατά την εκτίμηση της λειτουργικής κατάστασης των οργανικών βλάβης και στο ήπαρ σε φυματίωση και τις επιπλοκές της είναι ο προσδιορισμός της συνολικής ορού και άμεση χολερυθρίνη, AST (ACT), της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT). Δυναμικός προσδιορισμός του επιπέδου των αμινοτρανσφερασών. χολερυθρίνη στη θεραπεία των ασθενών με φυματίωση, ιδιαίτερα σε σοβαρές μορφές, - ένα υποχρεωτικό στοιχείο της βιοχημική εξέταση των ασθενών με φυματίωση και διεξάγεται σε μηνιαία βάση.

Η αξιολόγηση της λειτουργικής κατάστασης των νεφρών περιλαμβάνει τον προσδιορισμό της κρεατινίνης στον ορό και τον υπολογισμό του ρυθμού σπειραματικής διήθησης σύμφωνα με τον τύπο Cockcroft-Gault. Ο υπολογισμός του ποσοστού σπειραματικής διήθησης χρησιμοποιώντας δείγμα Reberg δίνει λιγότερο ακριβή αποτελέσματα.

Ο κύριος στόχος των δυναμικών βιοχημικών μελετών των ασθενών με φυματίωση είναι η παρακολούθηση της πορείας της διαδικασίας, η έγκαιρη ανίχνευση των παρενεργειών των φαρμάκων και η κατάλληλη διόρθωση των εμφανιζόμενων ομοιοστατικών διαταραχών.

Εφαρμογή βιοχημικών μεθόδων διερεύνησης σε εξωπνευμονική φυματίωση

Ο πιο ενημερωτικός δείκτης είναι η περιεκτικότητα σε φυτοστεατικό οξύ σε βιολογικά υγρά, αλλά ο ορισμός του συνδέεται με τεχνικές δυσκολίες (ανάγκη για αέρια χρωματογραφία και φασματομετρία μάζας).

Υποσχόμενος μέτρηση της αδενοσίνης δραστηριότητας δεαμινάσης - ένα ένζυμο, όπως ορίζεται στην υγρά: αρθρικό, περικαρδιακή, ασκίτη ή του νωτιαίου. Οι κύριοι παραγωγοί δεαμινάσης αδενοσίνης είναι λεμφοκύτταρα και μονοκύτταρα. Προσδιορισμός της αδενοσίνης δραστηριότητας δεαμινάσης σε βιολογικά υγρά διευκολύνει την διάγνωση της φυματιώδους υμενίτιδα, φυματίωση των λεμφαδένων, φυματιώδη μηνιγγίτιδα, φυματιώδη serozity.

Μερικοί βιοχημικοί δείκτες λόγω της μη ειδικότητάς τους προσδιορίζονται μόνο σε βιολογικά υγρά, κοντά στην εστία της βλάβης. Μετρήστε το επίπεδο των δεικτών σε απάντηση στην υποδόρια ή ενδοδερμική ένεση της φυματίνης (συνήθως πριν και 48 και 72 ώρες μετά). Μετά από αυτό, ο βαθμός αύξησης του επιπέδου δείκτη (σε%) υπολογίζεται σε σχέση με το αρχικό επίπεδο.

Ο βέλτιστος προσδιορισμός στα ούρα της δράσης ενός συγκεκριμένου οργάνου ενζύμου transamnidase, η εμφάνιση του οποίου σημειώνεται όταν επηρεάζονται οι νεφροί διαφόρων ειδών. Η μελέτη της transamidinase δικαιολογείται μόνο υπό συνθήκες υποδόριας ένεσης φυματίνης για να επιδεινωθεί η τοπική φλεγμονώδης διαδικασία. Καθορίστε την δραστηριότητα της τραναμιδίνης στα ούρα αρχικά και 24-72 ώρες μετά την εισαγωγή της 50 ΤΕ φυματίνης. Η διεύρυνση της ζύμωσης σε 2 φορές και περισσότερο επιτρέπει στο 82% των περιπτώσεων να διαφοροποιήσουν την ενεργό φυματίωση των νεφρών από την επιδείνωση της χρόνιας πυελονεφρίτιδας.

Με τη φυματίωση γυναικείων γεννητικών οργάνων, οι συγκεντρώσεις απτοσφαιρίνης και μαλονικής διαλδεΰδης στο αίμα προσδιορίζονται σε συνθήκες προκλητικής δοκιμασίας φυματίνης. Υποδόρια ένεση φυματίνης σε δόση 50 TE και 72 ώρες αργότερα πραγματοποίησε μια δεύτερη βιοχημική μελέτη. Στην περίπτωση της αιτιολογίας της φυματίωσης, ο βαθμός αύξησης του επιπέδου της απτοσφαιρίνης δεν είναι μικρότερος από 28% και το επίπεδο της μηλονικής αλδεΰδης είναι 39% ή περισσότερο. Ο προσδιορισμός της δραστικότητας της αδενοσίνης δεαμινάσης σε ένα περιτοναϊκό υγρό που λαμβάνεται από τον χώρο Douglas χρησιμοποιείται επίσης. Το στίγμα επανεξετάζεται 72 ώρες μετά την ενδοδερμική ένεση φυματίνης στις δόσεις των 0.1 TE και 0.01 TE στην προεξοχή των εσωτερικών γεννητικών οργάνων στο πρόσθιο κοιλιακό τοίχωμα. Σε ό, τι αφορά τη διαδικασία της φυματίωσης, η αύξηση της δραστικότητας της απαμινάσης της αδενοσίνης είναι 10% ή μεγαλύτερη σε σύγκριση με την αρχική.

Όταν επηρεάζεται το μάτι, εξετάζεται η εστιακή αντίδραση που συμβαίνει στο μάτι σε απόκριση της αντιγονικής διέγερσης. Δεν είναι επιθυμητό να αναπτυχθεί μια έντονη απόκριση, συνοδευόμενη από μείωση των οπτικών λειτουργιών. Επειδή η εκτίμηση των ελάχιστων εστιακής αντιδράσεις είναι συχνά δύσκολο να συστήσει το συμπέρασμα της αντικειμενοποίησης προσανατολίζεται παράλληλα προς, και από το βαθμό της αύξησης της απτοσφαιρίνης ορού, ή απαμινάση αδενοσίνης.

Όλες οι βιοχημικές μελέτες πρέπει να διεξάγονται σε συνδυασμό με άλλες μεθόδους.

Έρευνα στο σύστημα πήξης του αίματος

Συνάφεια της κατάστασης έρευνας του συστήματος πήξης του αίματος της φυματίωσης προκαλείται από την παρουσία ενός αριθμού ασθενών με πνευμονική φυματίωση αιμόπτυση ή πνευμονική αιμορραγία, καθώς και επιπλοκές hemocoagulation στη χειρουργική θεραπεία της φυματίωσης. Επιπλέον, φυσικώς συνδέονται TB λανθάνοντα ρέει ενδοαγγειακή hemocoagulation επηρεάζει την πορεία της νόσου και την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας.

Σε ασθενείς με πνευμονική φυματίωση επικράτηση των εξιδρωματική συνιστώσα φλεγμονής η παρατηρούμενη μείωση στην δραστικότητα αντιπηκτική του αίματος. Σε ασθενείς με χαμηλό επιπολασμό ενός συγκεκριμένου βλάβης στους πνεύμονες, με υπεροχή των παραγωγικών hemocoagulation ενδοαγγειακής φλεγμονώδη συνιστώσα εκφράζεται ελαφρώς. Σε ασθενείς με πνευμονική φυματίωση με αιμόπτυση και πνευμονική συστήματος πήξης του αίματος κατάσταση αιμορραγία είναι διαφορετική: σε ασθενείς με χαμηλό απώλεια αίματος κατά τη gemoptoe ύψος ή αμέσως μετά τη λήξη του υπάρχει μια απότομη αύξηση στην ικανότητα πήξης του αίματος που οφείλεται σε σοβαρή εντατικοποίηση των trombinoobrazovaniya διατηρώντας αυξημένη «δομική» πήξης. Σε ασθενείς με μαζική απώλεια αίματος που παρατηρείται δυναμικό πήξης μείωση σε βάρος της μείωσης της συγκέντρωσης ινωδογόνου. Δραστηριότητα παράγοντα XIII, αριθμός αιμοπεταλίων. Στο στάδιο της χειρουργικής θεραπείας σε ασθενείς με περιορισμένες μορφές της πνευμονικής φυματίωσης με σημαντικές παραβιάσεις συμβαίνει ομοιόστασης του συστήματος. Οι ασθενείς με εκτεταμένη διαδικασία κατά την εκτέλεση των pnevmon- ή plevropnevmonektomii συχνά αναπτύσσουν DIC, η οποία μπορεί να λάβει τη μορφή της «δεύτερης ασθένειας.»

Για την παρακολούθηση της κατάστασης της πήξης του αίματος σε ασθενείς με πνευμονική φυματίωση θα πρέπει να πραγματοποιείται προσδιορισμός του χρόνου ενεργοποιημένης μερικής θρομβοπλαστίνης (aPTT), ινωδογόνο, χρόνος θρομβίνης, δείκτη προθρομβίνης και στο χρόνο ροής και ο χρόνος πήξεως.

Ορμονική έρευνα

Πρόσφατες πειραματικές και κλινικές παρατηρήσεις δείχνουν την παρουσία των ορμονικών αλλαγών κατάστασης σε μια συγκεκριμένη φυματιώδη πνευμονία. Είναι αποδεδειγμένο ότι η διόρθωση της δυσλειτουργίας της υπόφυσης-επινεφριδίων, της υπόφυσης-θυρεοειδούς συστήματα και παγκρεατικής λειτουργίας σε συνδυασμό με τη θεραπεία αντι-TB συμβάλλουν στην ενεργοποίηση των ινογένεση και την επισκευή σε ένα τόπο εξειδικευμένης φλεγμονής.

Η λειτουργική κατάσταση του συστήματος της υπόφυσης-θυρεοειδούς κρίνεται από την περιεκτικότητα της τριϊωδοθυρονίνης στον ορό αίματος (Τ3), θυροξίνη (Τ4), μια ορμόνη διέγερσης θυρεοειδούς ενός σώματος υπόφυσης (TTG). Διαπιστώθηκε ότι υποκλινικό υποθυρεοειδισμό ανιχνεύεται στο 38-45% των ασθενών με πνευμονική φυματίωση, και τις περισσότερες φορές έχει διαγνωστεί με διάχυτη και fibro-σπηλαιώδεις διαδικασία μορφές. Με τις ίδιες μορφές, τα επίπεδα ως T3,και Τ4, και υπάρχει μια ανισορροπία αυτών των ορμονών με τη μορφή αύξησης της αναλογίας Τ4/ Τz.

Αδρενοκορτικοειδές λειτουργία αξιολογείται από το επίπεδο της κορτιζόλης στο ορό του αίματος, και ενδοκρινή λειτουργία του παγκρέατος - συγκέντρωση της ανοσο-αντιδραστικής ινσουλίνης. Στην οξεία φάση της λοίμωξης αυξάνει την ανάγκη για το ενδογενές κορτιζόλης και ινσουλίνης. Η υπερινσουλιναιμία επίσης υποδεικνύεται στην αντίσταση στην ινσουλίνη ιστών του σώματος, το οποίο είναι χαρακτηριστικό για οποιαδήποτε ενεργή φλεγμονώδη διαδικασία, κυρίως τους ειδικούς. Προσδιορισμός glyukokortiko idnoy-λειτουργία των επινεφριδίων με ενεργή πνευμονική φυματίωση αποκαλύπτει την παρουσία των Cushing στους περισσότερους ασθενείς. Τα φυσιολογικά επίπεδα της συγκέντρωσης στο αίμα κορτιζόλης στον ασθενή με λοιμώδη φλεγμονή στην οξεία περίοδο θα πρέπει να θεωρείται ως σχετική αποτυχία της γλυκοκορτικοειδούς λειτουργίας του φλοιού των επινεφριδίων που μπορεί να χρησιμεύσει ως βάση για τη συγκράτηση δόσεις επαρκή θεραπεία αντικατάστασης των γλυκοκορτικοειδών.

Σχεδόν το ένα τρίτο των ασθενών με πνευμονική φυματίωση μπορεί να καθοριστεί ότι το επίπεδο της Ince-lin έχουν αρκετά χαμηλή και κοντά στο κατώτερο όριο του φυσιολογικού, ενώ 13-20% έχουν βιώσει μια σημαντική υπερινσουλινισμού. Ο σχετικός υπο-και υπερινσουλινισμός είναι παράγοντες υψηλού κινδύνου για την ανάπτυξη παραβιάσεων του μεταβολισμού των υδατανθράκων ποικίλου βαθμού. Αυτές οι μεταβολές στη λειτουργική δραστηριότητα των παγκρεατικών Β-κυττάρων απαιτούν τακτική παρακολούθηση της γλυκόζης του αίματος σε ασθενείς με φυματίωση και έγκαιρη πρόληψη του διαβήτη. Επιπλέον. αυτό χρησιμεύει ως πρόσθετη αιτιολόγηση της σκοπιμότητας χρήσης φυσιολογικών δόσεων ινσουλίνης στην πολύπλοκη θεραπεία της φυματίωσης.

Σε γενικές γραμμές, τα χαμηλότερα επίπεδα των ορμονών του θυρεοειδούς και διαταραχές υπερκορτιζολαιμία τους και υπερινσουλινισμού μεγαλύτερη εμβέλεια σε ασθενείς με σοβαρή πορεία της φυματίωσης διαδικασίας, με εκτεταμένη βλάβη στους πνεύμονες και σοβαρά συμπτώματα της φυματίωσης δηλητηρίασης.

Μικροβιολογική διάγνωση της φυματίωσης

Οι μικροβιολογικές μελέτες που απαιτούνται για την αναγνώριση των ασθενών με φυματίωση, τον έλεγχο της διάγνωσης, την παρακολούθηση και τη διόρθωση χημειοθεραπεία αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της θεραπείας, με άλλα λόγια, από την εγγραφή της φυματίωσης ασθενή πριν από την παραλαβή από το Μητρώο.

Όλα τα επιδημιολογικά προγράμματα και προγράμματα βασίζονται σε εκτίμηση του αριθμού των βακτηριακών εκκρίσεων, οι οποίες δεν μπορούν να γίνουν χωρίς τη χρήση εργαστηριακών μεθόδων για την ανίχνευση της φυματίωσης των μυκοβακτηρίων. Σε μια έρευνα του λεγόμενου ανοργάνωτου πληθυσμού, το ποσοστό βακτηριακών εισβολέων φτάνει 70 ή περισσότερο, γεγονός που καθιστά τις εργαστηριακές μεθόδους επαρκώς αποτελεσματικό μέσο για την ταυτοποίηση των ασθενών με φυματίωση μεταξύ αυτής της ομάδας πληθυσμού.

Οι παραδοσιακές μικροβιολογικές μέθοδοι διάγνωσης της φυματίωσης είναι βακτηριοσκοπικές και πολιτιστικές μελέτες. Οι σύγχρονες μέθοδοι εξετάζουν την καλλιέργεια του mycobacterium tuberculosis σε αυτοματοποιημένα συστήματα, τη ρύθμιση της PCR. Ωστόσο, όλες αυτές οι μέθοδοι συνδυάζονται αναγκαστικά με κλασσικές βακτηριολογικές μεθόδους.

Συλλογή διαγνωστικού υλικού

Η αποτελεσματικότητα των εργαστηριακών μελετών εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από την ποιότητα του διαγνωστικού υλικού. Η συμμόρφωση με τους κανόνες συλλογής, αποθήκευσης και μεταφοράς διαγνωστικού υλικού και η ακριβής εφαρμογή του αλγορίθμου αξιολόγησης ασθενών επηρεάζει άμεσα το αποτέλεσμα και διασφαλίζει τη βιολογική ασφάλεια.

Για τη δοκιμή της φυματίωσης, χρησιμοποιούνται διάφορα υλικά. Λόγω του γεγονότος ότι η TB logkih- πιο κοινή μορφή της φυματίωσης αλλοιώσεις, το βασικό υλικό για την έρευνα εξετάζει πτυέλων και άλλα είδη από τα αποσπώμενα τραχειοβρογχικών: άνω εκκρίσεις της αναπνευστικής οδού που λαμβάνεται μετά από εισπνοή αεροζόλ: βρογχικά εκπλύματα? βρογχοκυψελιδικές εκπλύσεις. υλικό που λαμβάνεται με βρογχοσκόπηση, και ενδοπνευμονική διατραχειακή βιοψίες από βρογχικές αναρροφήσεις, λαρυγγική επιχρίσματα, εξιδρώματα από τις πληγές και επιχρίσματα αϊ.

Η αποτελεσματικότητα της έρευνας αυξάνεται εάν πραγματοποιηθεί μια ελεγχόμενη συλλογή υλικού από έναν ασθενή. Για το σκοπό αυτό, διατίθεται ένα ειδικά εξοπλισμένο δωμάτιο ή αγοράζονται ειδικές καμπίνες. Η συλλογή υλικού είναι μια επικίνδυνη διαδικασία, επομένως είναι απαραίτητο να συλλέγεται υλικό για έρευνα, τηρώντας τους κανόνες της μολυσματικής ασφάλειας.

Το υλικό για τη δοκιμή του mycobacterium tuberculosis συλλέγεται σε αποστειρωμένα μπουκάλια με σφιχτά βιδωτά καλύμματα για να αποφευχθεί η μόλυνση του περιβάλλοντος και η προστασία του συλλεγμένου υλικού από μόλυνση.

Τα φιαλίδια για τη συλλογή διαγνωστικού υλικού πρέπει να πληρούν τις ακόλουθες απαιτήσεις:

  • πρέπει να είναι κατασκευασμένα από υλικό ανθεκτικό στην κρούση.
  • θα πρέπει να λιώσει εύκολα κατά τη διάρκεια του αυτόκλειστου.
  • να είναι επαρκούς όγκου (40-50 ml):
  • έχουν ένα ευρύ άνοιγμα για τη συλλογή των πτυέλων (διάμετρος όχι μικρότερη από 30 mm).
  • να είναι εύκολο να χειριστεί, διαφανές ή ημιδιαφανές, ώστε να μπορείτε να αξιολογήσετε την ποσότητα και την ποιότητα του δείγματος που συλλέγονται χωρίς να ανοίξετε το καπάκι.

Για να επιτευχθούν τα βέλτιστα αποτελέσματα της έρευνας, πρέπει να τηρηθούν οι ακόλουθες συνθήκες:

  • Συλλέξτε το υλικό πριν από την έναρξη της χημειοθεραπείας.
  • το υλικό για τη μελέτη πρέπει να συλλέγεται πριν από την πρωινή λήψη τροφίμων και φαρμάκων.
  • για έρευνα είναι επιθυμητή η συλλογή τουλάχιστον 3 δειγμάτων φλέγματος πρωινού. Συλλέξτε τα πτύελα για 3 συνεχόμενες ημέρες.
  • το συλλεγόμενο υλικό πρέπει να παραδοθεί στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατό:
  • στην περίπτωση που είναι αμέσως αδύνατο να παραδοθεί το υλικό στο εργαστήριο, φυλάσσεται στο ψυγείο σε θερμοκρασία αέρα 4 ° C για όχι περισσότερο από 48 ώρες.
  • Κατά τη μεταφορά του υλικού, είναι απαραίτητο να παρακολουθείται στενά η ακεραιότητα των φιαλιδίων.

Τα ορθά συλλεγέντα πτύελα είναι βλεννώδη ή βλεννογονοειδή. Ο βέλτιστος όγκος του εξεταζόμενου πτυέλου είναι 3-5 ml.

Τα πτύελα συλλέγονται υπό την επίβλεψη ιατρού. Τα άτομα που είναι υπεύθυνα για τη συλλογή των πτυέλων πρέπει να ακολουθούν την εφαρμογή ορισμένων κανόνων:

  • είναι απαραίτητο να εξηγήσουμε στον ασθενή τον σκοπό της μελέτης και την ανάγκη να μη βλάψει όχι το σάλιο ή τη ρινοφαρυγγική βλέννα, αλλά το περιεχόμενο της βαθιάς αναπνευστικής οδού. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί ως αποτέλεσμα ενός παραγωγικού βήχα που εμφανίζεται μετά από αρκετές (2-3) βαθιές αναπνοές. Είναι επίσης απαραίτητο να προειδοποιήσει τον ασθενή ότι πρέπει να ξεπλένει το στόμα του με βραστό νερό για να αφαιρέσει το κύριο μέρος της μικροχλωρίδας που αναπτύσσεται στην στοματική κοιλότητα και τα κατάλοιπα τροφίμων που εμποδίζουν την εξέταση των πτυέλων.
  • ένας ιατρός που συμμετέχει στη συλλογή των πτυέλων, εκτός από ένα μπουρνούζι και ένα καπέλο, πρέπει να φοράει μάσκα, γάντια από καουτσούκ και ποδιά από καουτσούκ.
  • στέκεται πίσω από τον ασθενή, συνιστάται να κρατήσει το μπουκάλι όσο το δυνατόν πιο κοντά στα χείλη του και αμέσως να το χωρίσει σε φλέγμα καθώς βήχει και πρέπει να προβλεφθεί ότι η ροή του αέρα κατευθύνεται μακριά από τον εργαζόμενο στον τομέα της υγείας:
  • Μετά την ολοκλήρωση της συλλογής των πτυέλων, ο εργαζόμενος στον τομέα της υγείας πρέπει να κλείσει προσεκτικά το φιαλίδιο με ένα καπάκι και να αξιολογήσει την ποσότητα και την ποιότητα των πτυέλων που συλλέγονται. Στη συνέχεια, η φιάλη φέρει ετικέτα και τοποθετείται σε ειδικό μίξερ για μεταφορά στο εργαστήριο.

Αν ο ασθενής δεν παράγει φλέγμα, το προηγούμενο βράδυ και νωρίς το πρωί την ημέρα της συλλογής του υλικού που απαιτείται για να του δώσει ένα αποχρεμπτικό :. Ένα εκχύλισμα των ριζών του marshmallow (mukaltin), βρωμεξίνη, αμβροξόλη, κλπ - ή να εφαρμόσετε ένα ερεθιστικό εισπνοή χρησιμοποιώντας εξοπλισμό εγκατεστημένο στο δωμάτιο για να συλλέξει φλέγμα. Το υλικό που συλλέγεται με αυτόν τον τρόπο δεν υπόκειται σε διατήρηση και πρέπει να εξετάζεται την ημέρα της συλλογής. Για να αποφευχθεί η "σφαγή" του στο εργαστήριο προς την κατεύθυνση θα πρέπει να κάνει ένα ειδικό σήμα.

Εάν δεν διεξάγονται μικροβιολογικές μελέτες σε αυτό το εργαστήριο, το συλλεγόμενο διαγνωστικό υλικό πρέπει να παραδίδεται κεντρικά στο εργαστήριο, υπό την προϋπόθεση ότι το υλικό διατηρείται στα διαστήματα μεταξύ παραδόσεων στο ψυγείο ή με τη χρήση συντηρητικών. Παράδοση υλικού στο εργαστήριο σε κιβώτια μεταφοράς, τα οποία μπορούν εύκολα να απολυμανθούν. Κάθε δείγμα πρέπει να φέρει την κατάλληλη ετικέτα και ολόκληρη η παρτίδα πρέπει να συμπληρώνεται με συνοδευτικό έντυπο.

Τρόποι και συχνότητα εξέτασης ασθενών

Στην αρχική, αποκαλούμενη διαγνωστική εξέταση του ασθενούς για φυματίωση, είναι απαραίτητο να εξετάσουμε τουλάχιστον 3 τμήματα πτυέλων για 2 ή 3 ημέρες. που συλλέγονται υπό την επίβλεψη του ιατρικού προσωπικού, γεγονός που αυξάνει την αποτελεσματικότητα της μικροσκοπίας.

Ο πρωταρχικός έλεγχος για τη φυματίωση θα πρέπει να διεξάγεται από όλους τους ιατρικούς διαγνωστικούς οργανισμούς του συστήματος υγειονομικής περίθαλψης. Πρόσφατα, τα λεγόμενα κέντρα μικροσκοπίας, εξοπλισμένα με σύγχρονα μικροσκόπια και εξοπλισμό για επιδημική ασφάλεια, οργανώθηκαν με βάση τα κλινικά διαγνωστικά εργαστήρια για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας της αρχικής εξέτασης.

Σε εγκαταστάσεις κατά της φυματίωσης, χρησιμοποιείται μια εξέταση διαλογής που περιλαμβάνει εξέταση πτυέλων ή άλλο διαγνωστικό υλικό για τουλάχιστον 3 φορές για 3 ημέρες. Κατά τη διάρκεια της θεραπείας, πραγματοποιούνται τακτικά μικροβιολογικές μελέτες τουλάχιστον μία φορά το μήνα κατά τη διάρκεια της φάσης εντατικής χημειοθεραπείας. Κατά τη μετάβαση στη φάση της θεραπείας, οι μελέτες διεξάγονται λιγότερο συχνά - με διάστημα 2-3 μηνών, ενώ η συχνότητα της μελέτης μειώνεται σε δύο.

Χαρακτηριστικά της συλλογής διαγνωστικού υλικού για εξωπνευμονική φυματίωση

Χαρακτηριστικό παθολογικό υλικό με εξωπνευμονική μορφές φυματίωσης - Mycobacterium tuberculosis χαμηλή συγκέντρωση σε αυτό, η οποία απαιτεί μια πιο ευαίσθητων μεθόδων μικροβιολογικές μελέτες, κυρίως σε τεχνικές σποράς μέσου.

Με τη φυματίωση του ουρογεννητικού συστήματος, τα ούρα είναι το πιο προσιτό υλικό μελέτης. Η συλλογή ούρων πρέπει να γίνεται από ειδικά εκπαιδευμένο νοσηλευτή.

Τα εξωτερικά γεννητικά όργανα πλένονται με νερό με σαπούνι ή με ασθενές διάλυμα υπερμαγγανικού καλίου. Το εξωτερικό άνοιγμα της ουρήθρας αντιμετωπίζεται προσεκτικά. Σε ένα αποστειρωμένο φιαλίδιο, συλλέγεται ένα μέσο μέρος των πρωινών ούρων: στους άνδρες, φυσικά, στις γυναίκες, χρησιμοποιώντας έναν καθετήρα. Τα ούρα από τη νεφρική πυέλου συλλέγονται σε αποστειρωμένους σωλήνες με καθετηριασμό ενός ή δύο νεφρών, στην τελευταία περίπτωση - κατ 'ανάγκη ξεχωριστά από κάθε νεφρό. Μια μικρή ποσότητα από αυτά τα ούρα φυγοκεντρείται, εξετάζεται το ίζημα.

Στους άνδρες, το σπέρμα, οι σημειακοί όρχεις, το μυστικό του προστάτη υποβάλλεται σε φυγοκέντρηση για να ληφθεί ένα ίζημα. Με οποιοδήποτε εντοπισμό μιας συγκεκριμένης διαδικασίας στην περιοχή των γεννητικών οργάνων στους άνδρες, το μασάζ προστάτη μπορεί να προάγει την έκκριση εκκρίσεων που περιέχουν μυκοβακτηρίδιο φυματίωσης.

Το εμμηνορροϊκό αίμα στις γυναίκες συλλέγεται με αναρρόφηση ή με ένα καπάκι Kafka. Το λαμβανόμενο υλικό απελευθερώνεται από ερυθρά αιμοσφαίρια, πλένεται με αποσταγμένο νερό και ακολουθεί φυγοκέντρηση. Το ίζημα εξετάζεται.

Οι κατανομές από τον αυχενικό σωλήνα της μήτρας συλλέγονται σε κάποια ικανότητα ή καπάκι του Kafka, δηλαδή είναι επιθυμητό να συσσωρεύονται 1-2 ml παθολογικού υλικού.

Υλικό που λαμβάνεται από χειρουργικές παρεμβάσεις στους νεφρούς, στα γεννητικά όργανα. με βιοψίες, αποκόμματα από το ενδομήτριο, ομογενοποίηση. Για να γίνει αυτό, τοποθετείται σε αποστειρωμένο κονίαμα και συνθλίβεται με αποστειρωμένο ψαλίδι. Σε αυτό το πολτό προστέθηκε αποστειρωμένη άμμο ποταμού σε ποσότητα ίση με το βάρος του, και στη συνέχεια συμπληρώνεται με 0,5-1.0 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου, και τα πάντα λειοτριβήθηκε μέχρι μια πολτώδης μάζα με την προσθήκη ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου (4-5 πιΐ). Κατόπιν η μάζα αφήνεται να καθιζάνει για 1-1,5 λεπτά, εξετάζεται το υπερκείμενο υγρό.

Φυματίωση των οστών και των αρθρώσεων. Το κηλίδα (πύον αποστημάτων) που λαμβάνεται με αποστειρωμένη σύριγγα τοποθετείται σε αποστειρωμένα πιάτα και μεταφέρεται αμέσως στο εργαστήριο. Αποστειρωμένη πιπέτα, που έχει προηγουμένως υγρανθεί με αποστειρωμένο ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, παίρνει 2-5 ml πύου, μεταφέρεται σε φιάλη σφαιριδίων και προστίθενται άλλα 2-3 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου. Η φιάλη κλείνεται με φελλό και αναταράσσεται σε συσκευή τζόκερ για 8-10 λεπτά. Το ομογενοποιημένο εναιώρημα εξετάζεται.

Όταν κόλπων μορφές οστεοαρθρικά φυματίωσης λαμβάνοντας πύον από το συρίγγιο. Η άφθονη εκφόρτιση συλλέγεται απευθείας σε δοκιμαστικό σωλήνα. Σε περιπτώσεις άπαχο πυόρροια συρίγγιο πλύθηκε με αποστειρωμένο ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, και τα εκπλύματα συλλέγονται σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα, ή το κομμάτι του ταμπόν εμποτισμένο με πύον που αποστέλλονται για ανάλυση.

Χειρουργικά υλικού που έχει ληφθεί κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης για τα οστά και τις αρθρώσεις μπορεί να αποτελείται από πυώδη-νεκρωτικών μαζών, κοκκοποιήσεις, ουλή, ιστό των οστών αρθρικές μεμβράνες και άλλα υποστρώματα. Η θεραπεία του πραγματοποιείται, όπως και στη φυματίωση των νεφρών.

Μικροβιολογική μελέτη του αρθρικού υγρού σε διάλυμα κιτρικού νατρίου 3% (λόγος 1: 1) για την πρόληψη της πήξης πραγματοποιείται αμέσως μετά την παρακέντηση.

Φυματίωση των λεμφαδένων. Το πύλο, που εξάγεται κατά τη διάρκεια της διάτρησης των λεμφογαγγλίων, εξετάζεται επίσης. ως πόνος των αποστημάτων. Οι ιστοί των λεμφαδένων που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια χειρουργικών επεμβάσεων, βιοψίες, εξετάζονται, όπως και με άλλες μορφές φυματίωσης.

Η μελέτη των μαζών των κοπράνων στο μυκοβακτηρίδιο της φυματίωσης είναι εξαιρετικά σπάνια, λόγω της σχεδόν ολικής έλλειψης θετικών αποτελεσμάτων.

Μικροσκοπία μυκοβακτηριδίων

Η μικροσκοπία των πτυέλων είναι μια σχετικά γρήγορη, απλή και φθηνή μέθοδος που πρέπει να χρησιμοποιείται σε όλες τις περιπτώσεις με υποψία φυματίωσης. Επιπλέον, αυτή η μελέτη διεξάγεται για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας και να εξακριβωθεί η ανάκτηση ή η αποτυχία της θεραπείας εάν δεν υπάρχει δοκιμασία καλλιέργειας.

Χρησιμοποιούνται δύο μέθοδοι μικροσκοπικής εξέτασης:

  • μέθοδος άμεσης μικροσκοπίας, όταν ένα επίχρισμα παρασκευάζεται απευθείας από το διαγνωστικό υλικό.
  • μέθοδος μικροσκοπίας ενός ιζήματος που παρασκευάζεται από επεξεργασμένο απολυμαντικό υλικό για καλλιέργεια.

Η πρώτη μέθοδος χρησιμοποιείται σε εκείνα τα εργαστήρια όπου διεξάγονται μόνο μικροσκοπικές μελέτες (κλινικά και διαγνωστικά εργαστήρια του γενικού ιατρικού δικτύου).

Τα καλύτερα αποτελέσματα της μικροσκοπικής εξέτασης λαμβάνονται με συμπύκνωση του διαγνωστικού υλικού (για παράδειγμα με φυγοκέντρηση).

Για την ανίχνευση μυκοβακτηριδίου φυματίωσης με πιθανότητα 50% κατά τη διεξαγωγή της μικροσκοπίας, 1 ml πτύελου θα πρέπει να περιέχει περισσότερα από 5000 μικροβιακά κύτταρα. Το πτύελο των ασθενών με πνευμονικές μορφές φυματίωσης συνήθως περιέχει μια σημαντική ποσότητα βακτηρίων με οξύ οξύ, τα οποία τους επιτρέπουν να ανιχνεύονται αξιόπιστα με βακτηριοσκόπηση. Η διαγνωστική ευαισθησία αυτής της μεθόδου μπορεί να βελτιωθεί εξετάζοντας διάφορα δείγματα πτυέλων από έναν ασθενή. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα μιας βακτηριοσκοπικής εξέτασης δεν αποκλείει τη διάγνωση της φυματίωσης, καθώς τα πτύελα ορισμένων ασθενών περιέχουν λιγότερα μυκοβακτηρίδια απ 'ό, τι μπορεί να ανιχνευθεί με μικροσκοπία. Η κακή προετοιμασία του επιχρίσματος των πτυέλων μπορεί επίσης να προκαλέσει αρνητικό αποτέλεσμα μιας βακτηριοσκοπικής εξέτασης.

Η πιο συνηθισμένη μέθοδος για την ανίχνευση όξινων-γρήγορων μυκοβακτηρίων στο επίχρισμα είναι το χρώμα σύμφωνα με την Τsiol-Nelsen. Η μέθοδος βασίζεται στη διείσδυση της καρβολικής φουξίνης σε ένα μικροβιακό κύτταρο μέσω μίας μεμβράνης που περιλαμβάνει στρώμα κηρώδους-λιπιδίου, ενώ ταυτόχρονα θερμαίνεται και ισχυρή δράση χάραξης της φαινόλης. Ο επακόλουθος αποχρωματισμός του επιχρίσματος με ένα διάλυμα 25% θειικού οξέος ή 3% υδροχλωρικού οξέος οδηγεί σε αποχρωματισμό όλων των μη οξεο-γρήγορων δομών. Τα αποχρωματισμένα στοιχεία του επιχρίσματος χρωματίζονται με ένα διάλυμα 0,3% μπλε του μεθυλενίου. Τα μυκοβακτηρίδια δεν αντιλαμβάνονται τις συνήθεις χρωστικές ανιλίνης, ως αποτέλεσμα των οποίων τα μυκοβακτηρίδια με οξέα-γρήγορα βαμμένα κόκκινα χρώματα, και άλλα μικρόβια και κυτταρικά στοιχεία - σε μπλε χρώμα.

Για κηλίδες χρωματίστηκαν με Ziehl-Nelsenu χρησιμοποιούν το φως διοπτρικό μικροσκόπιο με φακό ελαιοκαταδυτικό (90- ή 100-πλάσια αύξηση) και το προσοφθάλμιο στην μεγέθυνση 7- ή 10-πλάσιο. Εξερευνήστε 100 οπτικά πεδία, τα οποία είναι αρκετά για να αναγνωρίσετε τα μόρια μυκοβακτηρίδια στο επίχρισμα. Σε αυτή την περίπτωση, αν το αποτέλεσμα αυτής της μελέτης είναι αρνητικό, για να επιβεβαιωθεί η συνιστώμενη δείτε περισσότερα από 200 πεδία του άποψη. Καταγράψτε τα αποτελέσματα, αναφέροντας τον αριθμό των ανιχνευόμενων βακτηρίων οξύ-γρήγορο (KUM).

Εκτός από αυτήν την τεχνική, χρησιμοποιούνται φθοροχρώματα χρώματος για μικροσκοπία φωταύγειας, η οποία επιτρέπει την επίτευξη των καλύτερων αποτελεσμάτων. Η χρήση αυτής της μεθόδου αυξάνει την αποτελεσματικότητα της μικροσκοπίας κατά 10-15%. Κατά τη θεραπεία των μυκοβακτηρίων με φωσφορίζουσες χρωστικές ουσίες (αουραμίνη, ροδαμίνη κλπ.), Αυτές οι ουσίες δεσμεύονται επίσης με τις κηρώδεις δομές του μικροβιακού κυττάρου. Όταν ακτινοβολούν έγχρωμα κελιά με μια συναρπαστική πηγή φωτός (ένα ορισμένο φάσμα υπεριώδους ακτινοβολίας), αρχίζουν να ανάβουν με πορτοκαλί ή έντονο κόκκινο φως σε μαύρο ή σκούρο πράσινο φόντο. Λόγω της μεγάλης φωτεινότητας και της αντίθεσης της ορατής εικόνας, η συνολική μεγέθυνση του μικροσκοπίου μπορεί να μειωθεί 4-10 φορές, το πεδίο όρασης διευρύνεται και ο χρόνος προβολής του παρασκευάσματος μειώνεται. Μαζί με αυτό, λόγω του πολύ μεγαλύτερου βάθους του πεδίου, μπορείτε να αυξήσετε την άνεση της μελέτης.

Όταν χρησιμοποιείτε μικροσκοπία φθορισμού για την προβολή της ίδιας περιοχής επίχρισμα ξοδεύουν σημαντικά λιγότερο χρόνο από ό, τι κάτω από το φως κηλίδες μικροσκοπία χρωματίστηκαν με Ziehl-Nelsenu. Εάν την ημέρα microscopist εργασίας Βλέπετε 20-25 των εγκεφαλικών επεισοδίων, στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φθορισμού, μπορεί να εξερευνήσουν για το ίδιο χρονικό διάστημα περισσότερο από 60-80 δείγματα. Οι έμπειροι microscopist γνωρίζουν ότι το χρώμα των κυττάρων με ένα μίγμα αουραμίνης και ροδαμίνη είναι κάπως ειδικό για οξεάντοχων βακίλλων, το οποίο σε αυτή την περίπτωση είναι χρυσά ράβδοι. Τα σαπροφύλια είναι ζωγραφισμένα σε πρασινωπό χρώμα.

Ένα άλλο σημαντικό πλεονέκτημα της μεθόδου της μικροσκοπία φθορισμού - την δυνατότητα να ανιχνεύει αλλαγμένη μυκοβακτηρίδια, χάνεται κάτω από την επίδραση των δυσμενών παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων εντατική χημειοθεραπεία, kislotousotoychivosti ιδιοκτησίας και δεν ανιχνεύεται σε σχέση με την παρούσα χρώση Ziehl-Nelsenu.

Τα μειονεκτήματα της μεθόδου μικροσκοπίας φθορισμού περιλαμβάνουν το σχετικά υψηλό κόστος του μικροσκοπίου και τη λειτουργία του. Ωστόσο, σε συγκεντρωτικά ή άλλα μεγάλα εργαστήρια, όπου το φορτίο υπερβαίνει τον κανόνα 3 τεχνικών εργαστηρίων που συνεργάζονται με τρία συμβατικά μικροσκόπια, είναι φθηνότερο να χρησιμοποιούνται αντί αυτού ένα φθορίζον μικροσκόπιο.

Οι βακτηριοσκοπικές μέθοδοι έχουν μάλλον υψηλή ειδικότητα (89-100%). Περίπου το 97% των θετικών αποτελεσμάτων που προκύπτουν με οποιαδήποτε μέθοδο μικροσκοπίας επιβεβαιώνονται σαφώς από τα αποτελέσματα της σποράς.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι στην μικροσκοπική εξέταση των επιχρισμάτων από παθολογικό υλικό δεν μπορεί να προσδιορίσει τα είδη των οξεάντοχων βακίλλων ανιχνεύεται. μέθοδος μικροσκοπίας επιτρέπει να αποφανθεί μόνο σχετικά με την παρουσία ή απουσία οξέος στην παρασκευή των μικροοργανισμών, η οποία μπορεί να εξηγηθεί από την ύπαρξη στη φύση ενός μεγάλου αριθμού των μορφολογικά παρόμοια με μυκοβακτηρίδια σύμπλοκο nontubercular οξύ ανθεκτικών μικροοργανισμών.

Τα αποτελέσματα της μικροσκοπίας αξιολογούνται σε ημιποσοτικές μονάδες.

Προκειμένου να είναι σε θέση να συγκρίνουν τα αποτελέσματα των διαφόρων μεθόδων μικροσκοπίας, οι εμπειρικές συντελεστές χορηγούνται. Για παράδειγμα, η σύγκριση των αποτελεσμάτων των επιχρισμάτων βάφονται με φθορίζουσες χρωστικές, η έρευνα δεδομένων φωτός μικροσκόπιο (1000 φορές μεγέθυνση), είναι απαραίτητο να διαιρέσει τον αριθμό των οξεάντοχων βακίλλων που ανιχνεύεται από το μικροσκόπιο φθορισμού, η αντίστοιχη συντελεστής σε 250-πλάσια μεγέθυνση - έως 10, 450 φορές - έως 4, με 630 φορές - έως 2.

Χαρακτηριστικά της μικροσκοπίας για την εξωπνευμονική φυματίωση

Κάνει άμεση μικροσκοπία και επίχρισμα παρασκευάζονται μετά από εμπλουτισμό με επακόλουθη χρώση από την Ziehl-Nelsenu ή φθορίζουσες χρωστικές. Άμεση επιχρίσματα μικροσκοπία είναι αναποτελεσματική λόγω της χαμηλής συγκέντρωσης της μυκοβακτηρίων στο υλικό, και ως εκ τούτου καλύτερη μεθόδους χρήση εμπλουτισμού. Η πιο αποτελεσματική είναι η φυγοκέντρηση. Εάν το βιολογικό υλικό είναι παχύρρευστο, φυγοκέντριση εφαρμόζεται με ταυτόχρονη υγροποίηση και ομογενοποίηση του υλικού, η οποία πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας φυγοκεντρητών υψηλής ταχύτητας με φυγοκεντρική δύναμη των 3000 g και υποχλωριώδους διαλύματα. Άλλες μέθοδοι συγκέντρωσης, όπως microflotation σήμερα δεν χρησιμοποιήθηκαν λόγω του σχηματισμού βιολογικά επικίνδυνων αερολυμάτων.

Η πολιτιστική μέθοδος διάγνωσης της φυματίωσης

Η μέθοδος της σποράς ή της μεθόδου καλλιέργειας είναι πιο ευαίσθητη από τη μικροσκοπία επίχρωσης και έχει πολλά πλεονεκτήματα έναντι της τελευταίας. Επιτρέπει την ανίχνευση αρκετών δεκάδων βιώσιμων μυκοβακτηρίων στο υλικό δοκιμής και έχει μεγάλη διαγνωστική αξία. Αυτό είναι ιδιαίτερα σημαντικό όταν εξετάζεται το υλικό από νεοδιαγνωσθέντες ή θεραπευόμενους ασθενείς που απελευθερώνουν μικρή ποσότητα μυκοβακτηριδίων.

Σε σύγκριση με το μικροσκόπιο, ο πολιτισμός μπορεί να αυξήσει τον αριθμό των διαπιστωμένων κρουσμάτων φυματίωσης κατά περισσότερο από 15-25%, καθώς και τον έλεγχο της φυματίωσης στα αρχικά στάδια, όταν η νόσος είναι ακόμη ανταποκρίνεται καλά στη θεραπεία. Ένα πολύ σημαντικό πλεονέκτημα της καλλιέργειας των ερευνητικών εξετάσει τη δυνατότητα απόκτησης καλλιέργειες του παθογόνου, το οποίο μπορεί να ταυτοποιηθεί και μελετηθεί σε σχέση με την ευαισθησία σε φάρμακα, μολυσματικότητα και άλλες βιολογικές ιδιότητες.

Τα μειονεκτήματα των μεθόδων καλλιέργειας περιλαμβάνουν τη διάρκεια τους (ο χρόνος αναμονής των υλικών φτάνει τις 10 εβδομάδες). υψηλότερο κόστος, πολυπλοκότητα επεξεργασίας διαγνωστικού υλικού.

Αρχές προκαταρκτικής επεξεργασίας διαγνωστικού υλικού

Οι συμβατικές μικροβιολογικές μέθοδοι δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διεξαγωγή μελετών σχετικά με τη φυματίωση. Αυτό οφείλεται στο γεγονός. ότι το mycobacterium tuberculosis αναπτύσσεται πολύ αργά και ότι τα περισσότερα κλινικά δείγματα περιέχουν πυογονικούς και στυπωτικούς μικροοργανισμούς, μύκητες ταχείας ανάπτυξης. Η ταχεία ανάπτυξή τους σε πλούσια θρεπτικά μέσα παρεμποδίζει την ανάπτυξη μυκοβακτηρίων και δεν επιτρέπει την απομόνωση του αιτιολογικού παράγοντα της φυματίωσης, οπότε το διαγνωστικό υλικό πρέπει να υποβληθεί σε προκατεργασία πριν από τη σπορά. Επιπλέον, τα μυκοβακτηρίδια που απελευθερώνονται από τους αεραγωγούς του ασθενούς συνήθως περιβάλλουν μια μεγάλη ποσότητα βλεννογόνου, καθιστώντας δύσκολη τη συγκέντρωσή τους. Από την άποψη αυτή, πριν από την φύτευση πτυέλων και άλλων παρόμοιων υλικών, η υγροποίησή τους, η απολύμανση είναι απαραίτητη.

Όλα τα απορρυπαντικά και οι αποικοδομητικές ουσίες έχουν περισσότερο ή λιγότερο έντονο τοξικό αποτέλεσμα στα μυκοβακτηρίδια. Ως αποτέλεσμα της επεξεργασίας, μέχρι το 90% των μυκοβακτηρίων μπορεί να πεθάνει. Για να κρατήσει αρκετό του μυκοβακτηριακού πληθυσμού, απαλλάσσοντας την ανάγκη να χρησιμοποιηθούν τεχνικές επεξεργασίας που επιτρέπουν, από τη μία πλευρά, να καταστείλει τις ταχέως αναπτυσσόμενη πυογόνα βακτήρια και σάπιο, και από την άλλη - για να διατηρηθεί η βιωσιμότητα των μυκοβακτηριδίων που υπάρχουν στο υλικό.

Ανάλογα με το υλικό, ο βαθμός της ομοιογένειας και της ρύπανσης για την προ-επεξεργασία με τη χρήση διαφόρων απολυμαντικό: Πτύελα - 4% διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου, διαλύματα trohzameschonnogo φωσφορικό νάτριο 10%, χλωριούχο βενζαλκόνιο, φωσφορικό τρινάτριο, NALC-NaOH (Ν-ακετυλο-L-κυστεΐνη υδροξείδιο του νατρίου) σε μια τελική συγκέντρωση 1% ΝαΟΗ, σε ούρα και άλλα υγρά υλικά - διάλυμα θειικού οξέος 3%, για τα μολυσμένα δείγματα, υλικά που περιέχουν λίπος-- διάλυμα οξαλικού οξέος σε 5%. Επιπλέον, σε μερικές περιπτώσεις χρησιμοποιούνται ένζυμα, επιφανειοδραστικά (απορρυπαντικά). Η χρήση του Tween και ορισμένων άλλων απορρυπαντικών συνοδεύεται από μικρότερο θάνατο μυκοβακτηριδιακών κυττάρων (40-50% επιβιώνουν). Ωστόσο, μπορούν να χρησιμοποιηθούν μόνο για υγρά υλικά. Η μεγαλύτερη κατανομή στον κόσμο ήταν το NALC-NaOH. που παράγεται σε σύνολα. Αυτή η μέθοδος επιτρέπει την κατανομή πάνω από το 85% του πληθυσμού των μυκοβακτηριδιακών κυττάρων. Απολύμανση tkanesoderzhaschih στερεά πιο δύσκολο να μαντέψει επειδή ο βαθμός διασποράς του υλικού κατά τη διάρκεια της ομογενοποίησης δύσκολη. Για παράδειγμα, η θεραπεία των βιοψιών των λεμφογαγγλίων συχνά συνοδεύεται από αυξημένη συχνότητα μόλυνσης από ξένη χλωρίδα. Σε αυτή την περίπτωση, μπορεί να χρησιμοποιηθεί 1% etonium.

Το μη ομοιογενές υλικό ομογενοποιείται με γυάλινες χάνδρες παρουσία απολυμαντικών. Τα υγρά υλικά προ-φυγοκεντρίζονται και μόνο ένα ίζημα επεξεργάζεται.

Τεχνικές σποράς και επώασης

Μετά την προεπεξεργασία, το υλικό φυγοκεντρείται, με αποτέλεσμα να καθιζάνουν τα μυκοβακτηρίδια και να αυξάνουν την περιεκτικότητά τους στο ίζημα ("εμπλουτισμός ιλύος"). Το προκύπτον ίζημα εξουδετερώνεται και ενοφθαλμίζεται (ενοφθαλμίζεται) με πυκνά θρεπτικά μέσα ή σωλήνες με υγρό (ημι-υγρό) μέσο. Από το υπόλοιπο ίζημα, παρασκευάζονται επιχρίσματα για μικροσκοπική εξέταση. Η τεχνική σποράς θα πρέπει να αποτρέπει τη διασταυρούμενη μόλυνση του διαγνωστικού υλικού.

Για αξιόπιστη κλινική ερμηνεία των αποτελεσμάτων μιας μικροβιολογικής μελέτης, πρέπει να τηρείται ο ακόλουθος κανόνας: οι μικροσκοπικές μελέτες και οι μελέτες καλλιέργειας πρέπει να εκτελούνται παράλληλα από το ίδιο δείγμα του διαγνωστικού υλικού.

Οι εμβολιασμένοι σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 37 ° C για 2 ημέρες σε οριζόντια θέση. Αυτό εξασφαλίζει πιο ομοιόμορφη απορρόφηση του υλικού στο μέσο καλλιέργειας. Μετά από 2 ημέρες, οι σωλήνες μεταφέρονται σε κατακόρυφη θέση και σφραγίζονται ερμητικά με καπάκι από καουτσούκ ή σιλικόνη για να αποφευχθεί η ξήρανση του σπαρμένου μέσου.

Οι καλλιέργειες διατηρούνται σε θερμοστάτη στους 37 ° C για 10-12 εβδομάδες με τακτική εβδομαδιαία προβολή. Για κάθε προεπισκόπηση, καταγράφονται οι ακόλουθες παράμετροι:

  • την περίοδο που παρατηρείται οπτικά από την ημέρα της σποράς της ανάπτυξης ·
  • ρυθμός ανάπτυξης (αριθμός CFU) ·
  • μόλυνση της καλλιέργειας από μια εξωτερική μικροβιακή χλωρίδα ή μύκητες (οι σωλήνες αυτοί απομακρύνονται).
  • έλλειψη ορατής ανάπτυξης. Οι σωλήνες παραμένουν στον θερμοστάτη μέχρι την επόμενη προβολή.

Θρεπτικά μέσα

Διάφορα θρεπτικά μέσα χρησιμοποιούνται για την καλλιέργεια μυκοβακτηρίων. πυκνό, ημι-υγρό, υγρό. Ωστόσο, κανένα από τα γνωστά θρεπτικά μέσα δεν έχει ιδιότητες που εξασφαλίζουν την ανάπτυξη όλων των μυκοβακτηριακών κυττάρων. Σε σχέση με αυτό, συνιστώνται 2-3 θρεπτικά μέσα διαφορετικής σύνθεσης για ταυτόχρονη αύξηση της αποτελεσματικότητας.

Ο ΠΟΥ συστήνει το περιβάλλον Levenstein-Jensen ως το πρότυπο μέσο για την πρωταρχική απομόνωση του αιτιολογικού παράγοντα της φυματίωσης και για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας του φαρμάκου. Αυτό είναι ένα περιβάλλον πυκνού ωαρίου στο οποίο η ανάπτυξη των μυκοβακτηρίων λαμβάνεται την 20η-25η ημέρα μετά την σπορά βακτηριοσκοπικά θετικού υλικού. Οι καλλιέργειες βακτηριοσκοπικά αρνητικού υλικού απαιτούν μεγαλύτερη περίοδο επώασης (έως 10-12 εβδομάδες).

Στη χώρα μας, η προτεινόμενη μέθοδος E.R. Φινλανδικό περιβάλλον αυγών Finn-II. Διαφέρει στο ότι, αντί της L-ασπαραγίνης, χρησιμοποιεί γλουταμινικό νάτριο, το οποίο προκαλεί άλλους τρόπους σύνθεσης των αμινοξέων των μυκοβακτηρίων. Η ανάπτυξη εμφανίζεται σε αυτό το μέσο κάπως νωρίτερα και η συχνότητα κατανομής των μυκοβακτηρίων είναι 6-8% υψηλότερη από αυτή του μέσου Lowenstein-Jensen.

Για να βελτιωθεί η αποτελεσματικότητα της βακτηριολογικής διάγνωσης της εξωπνευμονική φυματίωση είναι σκόπιμο να περιληφθεί στο σύμπλοκο θρεπτικά μέσα τροποποιημένα μέσο Finn-II. Για να επιταχυνθεί η ανάπτυξη σε θρεπτικό μέσο Finn-ΙΙ χορηγείται περαιτέρω νάτριο θειογλυκολικό 0,05%, τη μείωση της συγκέντρωσης οξυγόνου. Για την προστασία του ενζύμου από τα συστήματα Mycobacterium τοξικών προϊόντων της υπεροξείδωσης των λιπιδίων στο θρεπτικό μέσο Finn-ΙΙ οξικό χορηγηθούν αντιοξειδωτικό α-τοκοφερόλη σε συγκέντρωση των 0.001 mcg / ml. Η σπορά του διαγνωστικού υλικού διεξάγεται σύμφωνα με μια τυπική διαδικασία.

Στα εργαστήρια κατά της φυματιώσεως της Ρωσίας χρησιμοποιούνται άλλες τροποποιήσεις πυκνών θρεπτικών μέσων. πρότεινε τον G.G. Μορδοβιανό θρεπτικό μέσο "Νέο", που αναπτύχθηκε από τον V.A. Τα θρεπτικά μέσα A-6 και Α-9, κλπ.

Λόγω του γεγονότος ότι κατά τη διαδικασία της χημειοθεραπείας είναι η βλάβη σε διάφορα μεταβολικά συστήματα των μικροβιακών κυττάρων, μερικά μυκοβακτηριακών πληθυσμού χάνει την ικανότητα να αναπτύσσονται κανονικά σε συμβατικά θρεπτικά μέσα και απαιτεί οσμωτικά ισορροπημένο (ή ημι-υγρό) μέσα καλλιέργειας.

Αξιολόγηση και καταγραφή αποτελεσμάτων σποράς διαγνωστικού υλικού

Μερικά στελέχη και είδη μυκοβακτηριδίων αναπτύσσονται αργά, η ανάπτυξη μπορεί να εμφανιστεί ακόμη και την 90ή ημέρα. Ο αριθμός των καλλιεργειών αυτών είναι μικρός, αλλά αυτό καθιστά δυνατή την αντοχή των καλλιεργειών σε θερμοστάτη για 2,5-3 μήνες.

Οι μολυσματικές καλλιέργειες του mycobacterium tuberculosis αναπτύσσονται συνήθως σε περιβάλλοντα πυκνού αυγού με τη μορφή αποικιών μορφής R διαφόρων μεγεθών και ειδών. Οι αποικίες ξηρές, ρυτιδωμένες, ελεφαντόδοντο, ελαφρώς χρωματισμένες. Σε άλλα μέσα, η αποικία του mycobacterium tuberculosis μπορεί να είναι πιο υγρή. Μετά από μια πορεία χημειοθεραπείας ή κατά τη διάρκεια της θεραπείας, μπορούν να χορηγηθούν ομαλές αποικίες με υγρή ανάπτυξη (μορφές S).

Κατά την κατανομή καλλιέργειες χρησιμοποιώντας ένα σύνολο ειδικών μελετών για τη διάκριση Mycobacterium tuberculosis από Mycobacterium nontubercular και οξύ σαπρόφυτα.

Μια θετική απόκριση δίδεται μετά από μια υποχρεωτική μικροσκοπική εξέταση του χρώματος τσιρότου Τsiol-Nelsen από τις αναπτυγμένες αποικίες. Στην περίπτωση της ανάπτυξης μυκοβακτηριδίων σε επιχρίσματα, βρίσκονται φωτεινά κόκκινα ραβδιά που βρίσκονται μόνοι ή σε ομάδες που σχηματίζουν συστάδες με τη μορφή τσαγιού ή πλεξούδες. Σε νεαρά καλλιέργειες, ιδιαίτερα απομονώθηκε από μακροχρόνια θεραπεία ασθενών με χημειοθεραπεία, μυκοβακτήρια διαφέρουν της εκφρασμένης πολυμορφισμό, μέχρις ότου η παρουσία της ράβδου σχήματος, μαζί με σύντομες, σχεδόν κοκκοειδή ή επιμήκεις εκδόσεις που μοιάζουν με μυκήλιο.

Ο ρυθμός ανάπτυξης των μυκοβακτηριδίων υποδεικνύεται από το ακόλουθο σχήμα: (+) - 1-20 cfu in vitro (ελάχιστη βακτηριακή απέκκριση). (++) - 20-100 CFU in vitro (μέτρια απέκκριση βακτηρίων). (+++) -> 100 CFU in vitro (άφθονη απέκκριση βακτηρίων). Στην εργαστηριακή διάγνωση της φυματίωσης, δεν αρκεί να απαντήσουμε αν το μυκοβακτηρίδιο ανιχνεύεται με μία ή άλλη μέθοδο. έχουν λεπτομερή κατανόηση της έκτασης και της φύσης του πληθυσμού μυκοβακτηριδίων, της σύνθεσης και των ιδιοτήτων του. Αυτά τα δεδομένα μας επιτρέπουν να ερμηνεύσουμε σωστά την κατάσταση της διαδικασίας, να σχεδιάσουμε τακτικές και να διορθώσουμε εγκαίρως τη θεραπεία.

Τα τελευταία χρόνια, για να επιταχυνθεί η ανάπτυξη των μυκοβακτηρίων, έχουν προταθεί θρεπτικά μέσα σε βάση άγαρ με διάφορα αυξητικά πρόσθετα και χρήση ειδικού μείγματος αερίων. Για να επιτευχθεί η ανάπτυξη μυκοβακτηρίων σε αυτά τα μέσα, κατά τη διάρκεια της καλλιέργειας, δημιουργείται μια ατμόσφαιρα με υψηλή περιεκτικότητα σε διοξείδιο του άνθρακα (4-7%). Για το σκοπό αυτό, ειδικά CO2-φυτώρια. Ωστόσο, τα πιο ανεπτυγμένα αυτοματοποιημένα συστήματα καλλιέργειας μυκοβακτηρίων: MGIT-BACTEC-960 και MB / Bact.

Ένα τέτοιο σύστημα - Σύστημα MGIT (ανάπτυξη μυκοβακτηρίδια υποδεικνύοντας σωλήνα), η οποία αναφέρεται στην ανάπτυξη της υψηλής τεχνολογίας και προορίζεται για την ταχεία βακτηριολογική διάγνωση της φυματίωσης και της ευαισθησίας Mycobacterium στα φάρμακα πρώτης γραμμής, και ορισμένα φάρμακα δεύτερης γραμμής. Το MGIT επικεντρώνεται στη χρήση του ως μέρος της συσκευής VASTES-960. Οι μικροοργανισμοί καλλιεργούνται σε ειδικούς σωλήνες με υγρό θρεπτικό μέσο βασισμένο στο τροποποιημένο μέσο Middlebrook-7H9. Την τόνωση της ανάπτυξης των μυκοβακτηρίων και καταστολή συμπληρώματα ανάπτυξης εξωγενών μικροχλωρίδας χρησιμοποιείται Συμπλήρωμα Ανάπτυξης MGIT ανάπτυξη και την PANTA μίγμα αντιμικροβιακά.

Η ανάπτυξη μικροοργανισμών καταγράφεται οπτικά. Βασίζεται στον φθορισμό, ο οποίος εμφανίζεται όταν το οξυγόνο καταναλώνεται από τα μυκοβακτήρια κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης. Η εξαρτώμενη από οξυγόνο φθοροχρωμική βαφή βρίσκεται στον πυθμένα ενός ειδικού δοκιμαστικού σωλήνα και καλύπτεται με ένα στρώμα σιλικόνης. Αναπαραγωγή μυκοβακτηριδίων οδηγεί σε μία μείωση στην ποσότητα του οξυγόνου στο σωλήνα και τη μείωση της συγκέντρωσης που προκαλεί μια αύξηση στον φθορισμό, η οποία γίνεται ορατή υπό ακτινοβόληση με υπεριώδες φως σωλήνες και καταχωρείται αυτόματα φωτοαισθητήρα ενσωματωμένη συσκευή VASTES-960. Η ένταση της φωταύγειας καταγράφεται σε μονάδες ανάπτυξης (μονάδες αύξησης GU). Τα δεδομένα ανάπτυξης καταγράφονται στον υπολογιστή, όπου μπορούν να αποθηκευτούν αυτόματα. ανάλυση του υπολογιστή των καμπυλών ανάπτυξης μπορούν να παρέχουν πληροφορίες σχετικά με την παρουσία του μια ποικιλία από πισίνες μυκοβακτηριδίου, συμπεριλαμβανομένων nontubercular, και βοηθά επίσης να αξιολογήσει τις ιδιότητες ανάπτυξης των μυκοβακτηριδίων.

Ως αποτέλεσμα του χρόνου εμφάνισης του εν λόγω συστήματα μυκοβακτηριακή ανάπτυξη μειώνεται σημαντικά, κατά μέσο όρο 11 ημέρες VASTES-960 και 19 ημέρες σε MB / Bact σε 33 ημέρες με το επίπεδο στερεό θρεπτικό μέσο. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι αυτά τα συστήματα απαιτούν υψηλά ειδικευμένο προσωπικό. Σπορά υλικό για υγρά μέσα θα συνοδεύονται από σπορά σε μέσο Lowenstein-Jensen, παίζει το ρόλο του understudy σε περιπτώσεις όταν άλλα μέσα του Mycobacterium tuberculosis δεν επιτρέπουν την ανάπτυξη.

Προσδιορισμός ευαισθησίας φαρμάκων στα μυκοβακτηρίδια

Προσδιορισμός της σειράς και ο βαθμός ευαισθησίας των μυκοβακτηριδίων σε αντιφυματικά φάρμακα έχει σημαντικές κλινικές επιπτώσεις, καθώς και επιδημιολογικές Αξιολόγηση των ανθεκτικών στα φάρμακα φυματίωσης. Επιπροσθέτως, η παρακολούθηση της αντοχής στα φάρμακα καθιστά δυνατή την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του προγράμματος φυματίωσης στο σύνολό του, αποτελεί αναπόσπαστο δείκτη της απόδοσης όλων των συνιστωσών των δραστηριοτήτων κατά της φυματίωσης.

Πολλαπλότητα και συγχρονισμός της ευαισθησίας του φαρμάκου:

  • πριν από την έναρξη της θεραπείας μία φορά για τον καθορισμό της στρατηγικής και της τακτικής της θεραπείας:
  • (. Πτύελα, BAL υγρό, ούρα, εκκρίσεις, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, κλπ) όταν απομονώνεται από καλλιέργειες του ασθενούς από διαφορετικό υλικό εξετάζει όλα απομονώσεις:
  • στο τέλος της εντατικής φάσης της θεραπείας, ελλείψει κλινικής και ακτινολογικής δυναμικής:
  • εάν είναι απαραίτητο να αλλάξετε το θεραπευτικό σχήμα στις ακόλουθες περιπτώσεις:
    • απουσία επιχρίσματος πτύελου.
    • επαναμόνωση της καλλιέργειας μετά από αρνητικό επίχρισμα πτυέλων.
    • μια δραστική αύξηση του αριθμού CMB στο στυλεό μετά την αρχική πτώση. Είναι πολύ γνωστό ότι τα στελέχη του mycobacterium tuberculosis, τα οποία είναι ετερογενή όσον αφορά την ευαισθησία του φαρμάκου, απομονώνονται από το υλικό από έναν ασθενή με φυματίωση. Η ευαισθησία των στελεχών στα φάρμακα κατά της φυματίωσης μπορεί να διαφέρει στο φάσμα των φαρμάκων, το βαθμό, τη συχνότητα και το ποσοστό εμφάνισης αντοχής.

Ο βαθμός της ανθεκτικότητας στα φάρμακα του Mycobacterium tuberculosis προσδιορίσθηκε σύμφωνα με καθιερωμένα κριτήρια, τα οποία εστιάζονται στην κλινική σημασία και τη σταθερότητα εξαρτώνται από την ενεργότητα των αντιφυματικών φαρμάκων, η φαρμακοκινητική του, η συγκέντρωση στην αλλοίωση. τη μέγιστη θεραπευτική δόση και ούτω καθεξής.

Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας του φαρμάκου στα μυκοβακτήρια γίνεται επί του παρόντος με μικροβιολογικές μεθόδους:

  • Οι απόλυτες συγκεντρώσεις (μέθοδος αραίωσης σε πυκνά ή υγρά θρεπτικά μέσα),
  • αναλογίες,
  • συντελεστής αντίστασης.

Συνήθως σταθερότητα εκδηλώνεται ως οπτικά παρατηρήσιμη αύξηση της αποικίας του Mycobacterium tuberculosis, αλλά υπάρχουν τεχνικές που επάγουν τα πρώιμα στάδια της ανάπτυξης σε διαιρούμενα κύτταρα του Mycobacterium με τη μορφή αντίδρασης χρώματος. Αυτές οι μέθοδοι συντομεύουν τον χρόνο δοκιμής από 3-4 έως 2 εβδομάδες.

Όπως ενωμένη στη Ρωσία έχει επεκταθεί, συνέστησε με τη μέθοδο χημειοθεραπεία Επιτροπή ΠΟΥ απόλυτες συγκεντρώσεις, οι οποίες είναι από μεθοδολογική άποψη, είναι η πιο απλή, αλλά απαιτεί υψηλή ακρίβεια και την τυποποίηση των εργαστηριακών διαδικασιών. Η δοκιμή ευαισθησίας φαρμάκων αποτελείται από ένα σύνολο δοκιμαστικών σωλήνων με θρεπτικό μέσο τροποποιημένο με αντι-ΤΒ φάρμακα. Το σετ αποτελείται από 2-3 σωλήνες με διαφορετικές συγκεντρώσεις του καθενός από τα φάρμακα που χρησιμοποιούνται, σωλήνες ένας έλεγχος χωρίς φάρμακο για το περιβάλλον και ένα σωλήνα που περιέχει 1000 mcg / ml του νατρίου Sali tsilovokislogo ή 500 ug / ml paranitrobenzoynoy nontubercular οξέος για την ανίχνευση της ανάπτυξης των μυκοβακτηριδίων.

Για να παρασκευαστεί ένα σύνολο μέσων με παρασκευάσματα, χρησιμοποιείται ένα τροποποιημένο μέσο Levenstein-Jensen (χωρίς άμυλο), το οποίο χύνεται σε φιάλες. Σε κάθε μία από τις φιάλες, προστίθεται ένας ειδικός όγκος κατάλληλης αραίωσης του αντιβηχικού σκευάσματος. Το περιεχόμενο των φιαλών αναμειγνύεται επιμελώς, χύνεται σε σωλήνες και αναδιπλώνεται σε κεκλιμένη θέση επί 40 λεπτά σε θερμοκρασία 85 ° C. Συνιστάται η περιστροφή του μέσου σε μια ηλεκτρική μηχανή επανατύλιξης με αυτόματο έλεγχο θερμοκρασίας. Τετάρτη με φάρμακα κατά της φυματίωσης

Η 1η σειρά μπορεί να αποθηκευτεί στο ψυγείο στους 2-4 ° C για 1 μήνα, με παρασκευάσματα της δεύτερης σειράς - όχι περισσότερο από 2 εβδομάδες. Η αποθήκευση των μέσων με παρασκευάσματα σε θερμοκρασία δωματίου είναι απαράδεκτη. Κατά την παρασκευή διαλυμάτων φαρμάκων κατά της φυματίωσης, λαμβάνεται υπόψη η δραστικότητά τους, υπολογίζοντας τη συγκέντρωση προσαρμοσμένη για το μοριακό βάρος του μη ειδικού τμήματος του παρασκευάσματος, την καθαρότητα κ.λπ. Για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας του φαρμάκου, χρησιμοποιούνται μόνο χημικά καθαρές ουσίες.

Η αρχή της μεθόδου είναι να προσδιοριστεί η συγκέντρωση ενός αντιβηχικού φαρμάκου που αναστέλλει την ανάπτυξη ενός σημαντικού μέρους του πληθυσμού των μυκοβακτηριδίων. Αν γίνει σωστά, αυτή η μέθοδος έχει καλή αξιοπιστία.

Πριν από τη δοκιμή, είναι απαραίτητο να διασφαλιστεί ότι η απομονωμένη καλλιέργεια του mycobacterium tuberculosis δεν έχει ξένη μικροχλωρίδα. Από την καλλιέργεια των μυκοβακτηριδίων σε διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9% παρασκευάσθηκε ομοιογενές αιώρημα που περιέχει 500 εκατομμύρια μικροβιακών οργανισμών σε 1 ml (οπτική θολερότητα πρότυπο 5 μονάδες). Ο πολτός που προέκυψε αραιώθηκε με διάλυμα 0,9% χλωριούχου νατρίου (1:10) και μεταφέρονται με σιφώνιο 0,2 ml εναιωρήματος σε κάθε σύνολο σωλήνα του μέσου καλλιέργειας. Τα εμβολιασμένα σωλήνες τοποθετήθηκαν σε έναν επωαστήρα στους 37 ° C και διατηρήθηκε σε οριζόντια θέση για 2-3 ημέρες στην κεκλιμένη επιφάνεια του μέσου ομοιόμορφα εμβολιάζεται με ένα εναιώρημα Mycobacterium tuberculosis. Οι σωλήνες στη συνέχεια μεταφέρονται σε κατακόρυφη θέση και επωάζονται για 3-4 εβδομάδες. Τα αποτελέσματα καταγράφονται μετά από 3-4 εβδομάδες.

Επειδή ο χρονισμός των απελευθέρωσης παράγοντα από κλινικό υλικό σε θρεπτικά μέσα συνιστούν τουλάχιστον 1-1.5 μήνες της ευαισθησίας φαρμάκου μπορεί να ληφθεί με τη μέθοδο αυτή είναι όχι νωρίτερα από τη 2-2,5 μήνες μετά τη σπορά υλικό. Αυτό είναι ένα από τα κύρια μειονεκτήματα της μεθόδου.

Ερμηνεύουν τα αποτελέσματα προσδιορισμού της ευαισθησίας φαρμάκων στα μυκοβακτήρια βάσει ορισμένων κριτηρίων. Στις στερεά μέσα καλλιέργειας θεωρείται ευαίσθητη στη συγκέντρωση του φαρμάκου που περιέχεται στο μέσο, ​​εάν ο αριθμός των αποικιών των μυκοβακτηριδίων που καλλιεργούνται in vitro με αυτό το φάρμακο δεν υπερβαίνει το 20 είναι με άφθονη ανάπτυξη στο σωλήνα ελέγχου χωρίς φάρμακα. Μόνο με την παρουσία περισσότερων από 20 αποικιών, η καλλιέργεια θεωρείται ως ανθεκτική σε αυτή τη συγκέντρωση. Στην πράξη, όταν επιτυγχάνεται ανάπτυξη, οι δοκιμαστικοί σωλήνες πλησιάζουν τα 20 cfu. είναι απαραίτητο να ενημερώσουμε την κλινική μονάδα ότι η ευαισθησία ή η αντίσταση σε αυτή την περίπτωση είναι οριακή, καθώς μερικές φορές μπορεί να εξηγήσει την ασαφή δυναμική των κλινικών δεικτών.

Για διάφορα φάρμακα δημιουργείται μια ορισμένη συγκέντρωση, στην οποία παρατηρείται η αναπαραγωγή της κρίσιμης αναλογίας του πληθυσμού των μυκοβακτηριδίων. Αυτές οι συγκεντρώσεις ονομάζονται "κρίσιμες". Ως κριτήριο σταθερότητας, χρησιμοποιείται η ανάπτυξη του πληθυσμού των μυκοβακτηρίων σε ένα θρεπτικό μέσο με ένα παρασκεύασμα σε κρίσιμη συγκέντρωση.

Στην εγχώρια πρακτική της φυματίωσης, για τον προσδιορισμό της αντοχής στο φάρμακο, δεν περιορίζονται στον προσδιορισμό μόνο των κρίσιμων συγκεντρώσεων. Αυτό οφείλεται στο γεγονός. ότι το επίπεδο εκτεταμένη ορισμό της αντοχής σε φάρμακο επιτρέπει στον κλινικό ιατρό να τοποθετεί με μεγαλύτερη ακρίβεια η χημειοθεραπεία τακτική χρησιμοποιώντας τις γνώσεις του δυναμικοποίηση της δράσης των συνδυασμών φαρμάκων, σταυρωτό αναμένεται αντίσταση ή να εφαρμόζει μια πιο αποτελεσματική ομάδα φαρμάκων που χρησιμοποιούνται αντι-ΤΒ φάρμακα.

Η μέθοδος απόλυτης συγκέντρωσης είναι η απλούστερη, αλλά είναι και η πιο ευαίσθητη στα σφάλματα που γίνονται όταν εκτελείται. Πιο αξιόπιστη, ειδικά για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας στα φάρμακα δεύτερης γραμμής, και η κοινή έξω από τη Ρωσία είναι η μέθοδος των αναλογιών. Λαμβάνει υπόψη τις αδυναμίες της μεθόδου των απόλυτων συγκεντρώσεων, αλλά σε εκτέλεση είναι πιο επίπονη.

Η μέθοδος είναι πολύ παρόμοια με τη μέθοδο απόλυτης συγκέντρωσης. Η προετοιμασία των δοκιμαστικών σωλήνων με φάρμακα γίνεται με τον ίδιο τρόπο. όπως στη μέθοδο απόλυτης συγκέντρωσης. Ωστόσο, η δόση σπόρου του εναιωρήματος μυκοβακτηριδίου φυματίωσης μειώνεται κατά ένα συντελεστή 10. που εξαλείφει τη συχνότητα αυθόρμητης αντίστασης ορισμένων στελεχών μυκοβακτηριδίου φυματίωσης σε φάρμακα όπως το Etambutol, το Protionamide, το Capreomycin. Ως έλεγχος, χρησιμοποιούνται 2 ή 3 σωλήνες με δόση σπόρου ίση στους δοκιμαστικούς σωλήνες, διαδοχικά αραιωμένες 10 και 100 φορές. Το κριτήριο της σταθερότητας είναι το ποσοστό της οπτικώς παρατηρούμενης ανάπτυξης του mycobacterium tuberculosis. Για τα φάρμακα της 1ης σειράς, το κριτήριο σταθερότητας είναι η υπέρβαση της ανάπτυξης του 1% του αρχικού πληθυσμού, για τα φάρμακα της δεύτερης σειράς - αύξηση 1 ή περισσότερο από 10% της αρχικής, ανάλογα με την επιλεγμένη κρίσιμη συγκέντρωση.

Το 1997, μια ομάδα εργασίας του ΠΟΥ και της Διεθνούς Ένωσης για την αναγνώριση της καλής φυματίωσης ανθεκτικότητα της φυματίωσης των ναρκωτικών έχει κάνει προσαρμογές σε αυτά τα κριτήρια, προσφέροντας θεωρούνται ανθεκτικά μυκοβακτηρίδια, τα οποία αναπτύσσονται σε στερεά υλικά αυγό Lowenstein-Jensen στις ακόλουθες συγκεντρώσεις:

  • διυδροστρεπτομυκίνη - 4 μg / ml;
  • ισονιαζίδιο 0,2 μg / ml:
  • ριφαμπικίνη 40 μg / ml:
  • Η αιθαμβουτόλη είναι 2 μg / ml.

Το 2001, προτάθηκαν κρίσιμες συγκεντρώσεις για τα ακόλουθα φάρμακα δεύτερης γραμμής (για κρίσιμη αναλογία 1%):

  • καπερομυκίνη - 40 mcg / ml;
  • προτιοναμίδη - 40 mcg / ml;
  • καναμυκίνη - 30 μg / ml;
  • βιομυκίνη - 30 mcg / ml;
  • κυκλοσερίνη 40 μg / ml;
  • αμινοσαλικυλικό οξύ - 0,5 μg / ml;
  • ofloxacin - 2 μg / ml.

Τα αποτελέσματα ανάπτυξης αξιολογούνται μετά από 4 εβδομάδες ως προκαταρκτική και μετά από 6 εβδομάδες καλλιέργειας - ως τελική.

Για να προσδιοριστεί η ευαισθησία φαρμάκου προς πυραζιναμίδιο, το οποίο χρησιμοποιείται ευρέως στη σύγχρονη χημειοθεραπεία της φυματίωσης, της συνιστώμενης κρίσιμη συγκέντρωση των 200 ug / ml. Ωστόσο, εξακολουθεί να μην υπάρχει γενικά αποδεκτή μέθοδος για τον προσδιορισμό της αντίστασης σε αυτό το φάρμακο σε στερεά θρεπτικά μέσα, λόγω της αντιβακτηριακής δραστικότητας του εκτίθεται μόνο σε ένα όξινο μέσο (ρΗ o C?

  • απουσία χρωματισμού (ελεφαντόδοντο) ·
  • έντονο στιλπνό χρώμα.
  • μια θετική δοκιμή νιασίνης.
  • δοκιμή θετικής αναγωγάσης σε νιτρικά άλατα.
  • απουσία θερμοσταθερής καταλάσης (68 ° C).
  • Η απουσία ανάπτυξης σε ένα μέσο Levenstein-Jensen που περιέχει:
    • 1000 μg / ml σαλικυλικό νάτριο,
    • 500 μg / ml παραπανιοβενζοϊκού οξέος,
    • 5% χλωριούχο νάτριο:
  • ανάπτυξη παρουσία 1-5 μg / ml θειοφαινο-2-καρβοξυλικού οξέος.
  • Η συνάφεια της διαφοροποίησης των απομονωμένων μυκοβακτηρίων θα αυξηθεί σημαντικά με την αύξηση της συχνότητας καταγραφής περιπτώσεων HIV / AIDS που σχετίζονται με τη φυματίωση ή τη μυκοβακτηρίωση. Προς το παρόν, δεν υπάρχει απόλυτη βεβαιότητα για την ετοιμότητα των πρακτικών περιφερειακών εργαστηρίων να εκτελούν σωστά αυτόν τον όγκο εργασίας.

    Ανοσολογική διάγνωση της φυματίωσης

    Υπάρχει ένας αριθμός της καθολικής φαινομένων, τα ναρκωτικά και ανοσολογικές δοκιμασίες, οι οποίες είχαν αρχικά αυτό ανακαλύφθηκε σε φυματίωση ή μοντέλα της ανοσολογικής απόκρισης σε μυκοβακτηρίδια. Αυτές περιλαμβάνουν BCG φυματινικό, ένα τέτοιο φαινόμενο, όπως δερματική DTH (φυματίνης - Pirquet και Mantoux αντιδράσεως), η αντίδραση να υποδόριο φυματίνης ευαισθητοποιημένα ζώα (φαινόμενο Koch). Ένα από τα πρώτα αντισώματα σε λοιμώδη νοσήματα ανιχνεύθηκε επίσης στη φυματίωση. Φυσικά, η βαθύτερη η κατανόηση της καλής μηχανισμών φυματίωσης ανοσία και γενετικού ελέγχου τους, τόσο μεγαλύτερη μπορεί να είναι η χρήση ανοσολογικών μεθόδων και φάρμακα που επηρεάζουν το ανοσοποιητικό σύστημα, την επίλυση πρακτικών προβλημάτων της φυματίωσης.

    Το πιο σημαντικό και δύσκολο πρακτικό πρόβλημα θεωρείται σήμερα η ανίχνευση της φυματίωσης στη διαδικασία μαζικής εξέτασης του πληθυσμού. Ωστόσο, παρά τις πολυάριθμες αναφορές για «επιτυχίες» (σε περιορισμένο υλικό), δεν υπάρχει κατάλληλη ανοσολογική μέθοδος (αναπαραγώγιμη σε «όποια όπλα») και ένα φάρμακο κατάλληλο για το σκοπό αυτό.

    Οι ανοσολογικές μέθοδοι, ιδιαίτερα οι ορολογικές μελέτες (προσδιορισμός αντιγόνων, αντισωμάτων) και δοκιμασίες που προκαλούν φυματίωση, χρησιμοποιούνται ευρέως στην κλινική πρακτική.

    Πρώτον, μεταξύ των ανοσολογικών μελετών που χρησιμοποιούνται στη διαφορική διάγνωση, υπάρχουν ορολογικές μέθοδοι - ο προσδιορισμός αντιγόνων και αντισωμάτων σε διαφορετικά περιβάλλοντα του σώματος.

    Η ειδικότητα των αντισωμάτων κατά της φυματίωσης των μυκοβακτηρίων εξαρτάται από τα αντιγόνα που χρησιμοποιούνται στην ανοσοδοκιμασία. Προτείνεται μια σημαντική ποσότητα αντιγόνων, η πρώτη από τις οποίες είναι η φυματίνη PPD:

    • PAP και άλλα πολύπλοκα παρασκευάσματα από το υγρό καλλιέργειας.
    • υπερηχητική αποσύνθεση.
    • Εκχύλισμα Triton και άλλα πολύπλοκα παρασκευάσματα κυτταρικών τοιχωμάτων ·
    • 5-αντιγόνο (Daniel);
    • 60-αντιγόνο (Coccito);
    • Lipoarabinomannan;
    • παράγοντα καλωδίου (τρεαλόζη-6,6-δι-μυκολικό).
    • φαινολικά και άλλα γλυκολιπίδια.
    • λιποπολυσακχαρίτες.
    • αντιγόνο σύνδεσης ινονηκτίνης.
    • πρωτεΐνες (πιο συχνά ανασυνδυασμένες). 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 CDA, κλπ.

    Ως αποτέλεσμα πολυετούς έρευνας από Ρώσους και ξένους επιστήμονες έχουν αποκαλύψει τους βασικούς νόμους και την αποτελεσματικότητα του αντισώματος ορολογική διάγνωση της φυματίωσης: το πιο πολύπλοκο αντιγόνο, την υψηλότερη ευαισθησία και χαμηλότερη ειδικότητα της δοκιμής. Εξειδίκευση σε διάφορες χώρες ποικίλλει ανάλογα με τον πληθυσμό της λοίμωξης μυκοβακτηριδίου φυματίωσης και nontubercular μυκοβακτηρίδια από την άσκηση BCG εμβολιασμό και άλλοι. Στα παιδιά, το πληροφοριακό περιεχόμενο των οροδιάγνωση είναι χαμηλότερο από ότι στους ενήλικες. Στην πρωτογενή φυματίωση (πιο συχνά παιδιά), ο ορισμός της IgM είναι πιο ενημερωτικός. με δευτερογενή IgG. Σε HIV-μολυσμένους ασθενείς, η πληροφοριακή αξία της οροδιαγνωστικής κατά τον προσδιορισμό των αντισωμάτων μειώνεται. προσδιορισμό της αποδοτικότητας των αντισωμάτων εξαρτάται από τον αριθμό των «Κλινικές πτυχές»: δραστηριότητα διεργασία (η παρουσία ή η απουσία της φθοράς παρουσία «απομόνωση» μυκοβακτηρίδια κοιλοτήτων, ο βαθμός διείσδυσης), η επικράτηση της διαδικασίας, η διάρκεια της ροής του.

    Η ευαισθησία της μεθόδου της ενζυμικής ανοσοπροσδιορισμού (ELISA) είναι περίπου 70%. Η ανεπαρκής αποτελεσματικότητα της μελέτης οφείλεται στη χαμηλή της ειδικότητα. Προηγουμένως, ελήφθη υπόψη η δυνατότητα χρήσης ορολογικού διαγνωστικού ελέγχου σε ομάδες υψηλού κινδύνου, ιδιαίτερα μεταξύ ατόμων με μετα-φυματίωση μεταβολές στους πνεύμονες.

    Για να ενισχυθεί η ιδιαιτερότητα ELISA συνεχίσει την αναζήτηση για πιο ειδικά αντιγόνα, συμπεριλαμβανομένων και εκείνων που παράγεται με γενετική μηχανική: (βλ. Παραπάνω) ESAT-6, και άλλοι.. Χρήση αυστηρά ειδικών αντιγόνων (38 kDa, ESAT) αυξάνει την ειδικότητα. αλλά μειώνει σημαντικά την ευαισθησία της ανάλυσης. Μαζί με IFA (συστήματα δοκιμών πειραματικό εργαστήριο. Π.χ. κιτ Pathozyme ELISA) παρέχει επίσης κιτ με πλευρική ανοσοχρωματογραφίας διήθησης (Mycodot), καθώς και άλλες παρόμοιες δοκιμές (dot-ανάλυση επί της μεμβράνης) με οπτική εκτίμηση του αποτελέσματος της δοκιμής. Κατά τη διάρκεια αυτών των δοκιμών, η ανάλυση πραγματοποιείται για 10-30 λεπτά. δεν απαιτούν ειδικό εξοπλισμό, απαιτούν μια οπτική αξιολόγηση των αποτελεσμάτων, η οποία συνδέεται με μια ορισμένη υποκειμενικότητα. Αυτές οι μέθοδοι έχουν περίπου την ίδια ευαισθησία και ειδικότητα χαρακτηριστικά (70% και 90-93%, αντίστοιχα), όπως το παραδοσιακό ELISA.

    Η χρήση των μεθόδων της ανοσολογικής ανάλυσης έχει καθορισμένη αξία ως επιπλέον, που λαμβάνεται υπόψη στο σύμπλεγμα των χρησιμοποιούμενων μεθόδων, στη διαφορική διάγνωση της φυματίωσης, ιδιαίτερα στη διάγνωση των εξωπνευμονικών μορφών της. Η πιο αποτελεσματική μέθοδος ELISA είναι στη διάγνωση της μηνιγγίτιδας της φυματίωσης στη μελέτη του εγκεφαλονωτιαίου υγρού. Στην περίπτωση αυτή, η ευαισθησία της ανάλυσης είναι 80-85%, και η ειδικότητα είναι 97-98%. Υπάρχουν δεδομένα σχετικά με την αποτελεσματικότητα της ανίχνευσης αντισωμάτων κατά της φυματίωσης των μυκοβακτηρίων στο δακρυϊκό υγρό στη διάγνωση της φυματιώδους ραγοειδίτιδας.

    Επαγωγή της σύνθεσης ιντερφερόνης γάμμα in vitro

    Η ιντερφερόνη γάμμα (ΙΡΝ-γ) είναι ένας ειδικός παράγοντας ανοσολογικής προστασίας που πραγματοποιείται με ενεργοποίηση συστημάτων ενζύμων μακροφάγων. Η επαγωγή σύνθεσης ΙΡΝ-γ από ευαισθητοποιημένα Τ-λεμφοκύτταρα προκαλεί την αλληλεπίδρασή τους με αντιγόνα μυκοβακτηριδίων.

    Ως αντιγόνα που χρησιμοποιούνται ως PPD της φυματίνης. και τα ειδικά αντιγόνα, που λαμβάνονται με γενετική μηχανική, ιδίως αντιγόνα ESAT-6 (πρώιμη εκκριμένο αντιγόνο που έχει μοριακό βάρος 6 kDa) και CFP-10 (διήθημα πρωτεΐνη καλλιέργειας 10 kDa). Γενετική μηχανική ή ανασυνδυασμένα αντιγόνα απουσιάζουν στα κύτταρα του εμβολίου BCG και άλλων μυκοβακτηρίων. Κατά τη χρήση της φυματίνης, τα αποτελέσματα της δοκιμής επαγωγής IFN-γ είναι συγκρίσιμα με τα αποτελέσματα της δερματικής δοκιμασίας φυματίνης (άμεση συσχέτιση). Όταν χρησιμοποιούνται αντιγόνα γενετικής μηχανικής, τα αποτελέσματα των δοκιμών είναι πιο συγκεκριμένα και δεν εξαρτώνται από τον προηγούμενο εμβολιασμό με BCG. Κατά τη δοκιμασία εμβολιασμένων ατόμων που δεν έρχονται σε επαφή με λοίμωξη από φυματίωση, η ειδικότητα της δοκιμής είναι 99%. Η ευαισθησία της δοκιμής σε ασθενείς με φυματίωση κυμαίνεται από 81 έως 89%.

    οι δοκιμές και διαγνωστικά εργαλεία έχουν αναπτυχθεί με βάση την βραχυπρόθεσμη καλλιέργεια των κυττάρων ή μονοπύρηνων κυττάρων ολικού αίματος απομονώνονται από το αίμα με αντιγόνα του Mycobacterium tuberculosis in vitro με εν συνεχεία προσδιορισμό της συγκέντρωσης ΙΡΝ-γ ή με απαρίθμηση του αριθμού των Τ-λεμφοκυττάρων τα οποία συνθέτουν IFN-γ. Η συγκέντρωση της ιντερφερόνης που συντέθηκε ίη vitro προσδιορίστηκε με ELISA χρησιμοποιώντας μονοκλωνικά αντισώματα δεσμεύσεως της ΙΡΝ-γ. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο βαθμονόμησης της ΙΡΝ-γ προσδιορίστηκε με τη συγκέντρωσή του στο δοκιμαστικό σωλήνα ή φρεάτια της πλάκας.

    Κατά την εκτέλεση της δοκιμής Elispot, ο αριθμός των Τ-λεμφοκυττάρων που συνθέτουν την ΙΡΝ-γ. μετριούνται στην επιφάνεια μιας πλάκας επικαλυμμένης με αντισώματα έναντι της ΙΡΝ-γ.

    προγραμματιστές Diagnosticum σχετικά με την ΙΡΝ-γ in vitro μέσω της επαγωγής, η οποία έχει εγκριθεί από τον Οργανισμό Φαρμάκων και τα προϊόντα των ΗΠΑ, ισχυρίζονται ότι η δοκιμαστική είναι αδύνατο να γίνει διάκριση μεταξύ λανθάνουσας λοίμωξης από ενεργή φυματίωση. Επομένως, σε περιοχές με υψηλό επίπεδο μόλυνσης, η δοκιμή δεν είναι άμεσα διαγνωστική. Ωστόσο, στη χώρα μας, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διαφοροποίηση της φυματίωσης στα παιδιά από αλλεργίες μετά τον εμβολιασμό, καθώς και για την αξιολόγηση του επιπέδου της ειδικής ανοσίας κατά τη διαδικασία επεξεργασίας.

    Επί του παρόντος, μελετάται το εγχώριο σύστημα δοκιμής για τον προσδιορισμό της επαγωγής της σύνθεσης ΙΡΝ-γ με ειδικά αντιγόνα φυματίωσης in vitro.

    Ανοσοποιητική κατάσταση και πορεία της φυματίωσης, ανοσοκαταστολή

    Στη διαδικασία θεραπείας της φυματίωσης στους ανθρώπους, υπάρχουν αλλαγές στην αντιγοναιμία και στην κατάσταση του ανοσοποιητικού συστήματος.

    Τα δεδομένα σχετικά με τις αλλαγές στα εκκρίματα και τους ιστούς είναι σε μεγάλο βαθμό αντιφατικά. Το μόνο πράγμα που μπορεί να διαπιστωθεί με βάσιμο λόγο είναι ότι στα κυτταρικά κοκκιώματα, κατά κανόνα, ανιχνεύεται ένας σημαντικός αριθμός ενεργοποιημένων Τ-λεμφοκυττάρων.

    Είναι λογικό να εξετάσουμε δύο ακόμη διατάξεις που είναι απαραίτητες για την κατανόηση του ρόλου των ανοσολογικών μηχανισμών στη θεραπεία της φυματίωσης στους ανθρώπους:

    • Οι ασθενείς με AIDS παρουσιάζουν ιδιαίτερα υψηλή συχνότητα αντοχής σε πολλαπλά φάρμακα.
    • με πολλαπλή αντοχή φαρμάκου (και απουσία μόλυνσης με Ηΐν), διαταραχές ανοσίας (ιδιαίτερα η σύνδεση Τ-κυττάρου) είναι ιδιαίτερα σημαντικές.

    Όταν φυματίωση ευρέως εφαρμόζονται διάφορες μέθοδοι ανοσορύθμιση: είναι κατά κύριο λόγο τα φάρμακα που δρουν κατά κύριο λόγο για την Τ-κυτταρική ανοσία και ένα σύστημα μονοπύρηνων φαγοκυττάρων (ορμόνες θυμικού, ισοφορόνη, likopid, polioksidony et al.). καθώς και ολόκληρα (εξασθενημένα) μυκοβακτήρια και τα συστατικά τους.

    Μοριακή-βιολογική διάγνωση της φυματίωσης

    Για τις μεθόδους μοριακής βιολογίας στη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών περιλαμβάνουν, κυρίως, οι μέθοδοι που βασίζονται στο χειρισμό με το γονιδιωματικό υλικό των βακτηριακών και ιικών παθογόνων για τον εντοπισμό συγκεκριμένων γενετικό υλικό - τμήματα DNA που έχει μία αλληλουχία νουκλεοτιδίων ειδική για έναν συγκεκριμένο στελέχη τύπου ή παθογόνου να αναλύσει συγκεκριμένες DNA αλληλουχίες των γονιδίων που καθορίζουν την ευαισθησία του παθογόνου σε συγκεκριμένες φαρμακευτικές ουσίες, αλλά επίσης να αναλύσει την λειτουργική δραστηριότητα ορισμένων γονιδίων του παθογόνου παράγοντα. Μοριακές βιολογικές τεχνικές ήταν ευρέως στην επιστημονική έρευνα και την πρακτική εφαρμογή στη διάγνωση και την παρακολούθηση των διαφόρων βακτηριακών και ιογενών λοιμώξεων μετά το άνοιγμα το 1985, Carrie Myullisom (νικητής του βραβείο Νόμπελ. 1989) αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

    Αρχές και δυνατότητες της μεθόδου αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης

    Η PCR επιτρέπει την πολλαπλασιασμό in vitro μιας αλληλουχίας νουκλεοτιδίων (θραύσμα DNA του παθογόνου) για αρκετές ώρες σε εκατομμύρια φορές. Η αντίδραση παρουσία απλών αλυσίδων DNA προσδιορίζει την εξαιρετικά υψηλή ευαισθησία της ανάλυσης.

    Η αλληλουχία νουκλεοτιδίων ορισμένων περιοχών στην αλυσίδα DNA προσδιορίζει την γενετική ταυτότητα του μικροοργανισμού, γεγονός που εξηγεί την υψηλή ειδικότητα της PCR.

    Η αξία αυτής της τεχνικής για την ανίχνευση και τη διερεύνηση των χαρακτηριστικών που προκαλούνται από Mycobacterium tuberculosis βιολογικά χαρακτηριστικά ενός μικροοργανισμού που έχει πολύ αργή ανάπτυξη: χρόνος της Mycobacterium tuberculosis DNA διπλασιασμού όταν η καλλιέργεια είναι 12-24 ώρες.

    Η αρχή της μεθόδου PCR συνίσταται στην ενίσχυση - πολλαπλάσια, εκατομμύρια φορές. πολλαπλασιάζοντας τα τμήματα μίας συγκεκριμένης αλληλουχίας ϋΝΑ σε ένα μικροβιόγραμμο σωλήνα κατά τη διάρκεια μίας κυκλικής επανάληψης των ακόλουθων τριών σταδίων αντίδρασης, καθένα από τα οποία περνά σε ένα διαφορετικό καθεστώς θερμοκρασίας:

    • Στάδιο Ι - μετουσίωση του δίκλωνου ϋΝΑ κατά τη θέρμανση με απόκλιση των αλυσίδων του.
    • II στάδιο - συμπληρωματική δέσμευση (υβριδισμός) των εκκινητών (πρωτεύοντα ολιγονουκλεοτίδια) με τερματικά τμήματα αλυσίδων αυστηρά ειδικών, επιλεγμένων για πολλαπλασιασμό του θραύσματος DNA.
    • Στάδιο ΙΙΙ - ολοκλήρωση της αλυσίδας θραύσματος ϋΝΑ με τη βοήθεια μιας θερμοσταθερής ϋΝΑ πολυμεράσης.

    Για ενίσχυση in vitro, πρέπει να υπάρχουν μόρια DNA μήτρας. τέσσερα είδη τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοζιτών (νουκλεοτίδια) που περιέχουν κατάλληλες αζωτούχες βάσεις: αδενίνη (Α), θυμίνη (Τ), γουανίνη (G), κυτοσίνη (C)? τεχνητά συντιθέμενα εναρκτήρια ολιγονουκλεοτίδια (εναρκτήρες) που αποτελούνται από 18-20 ζεύγη βάσεων, θερμοσταθερή ένζυμο ϋΝΑ πολυμεράση με βέλτιστη θερμοκρασία 68-72 ° C και ιόντα μαγνησίου.

    Η εξειδίκευση της PCR εξαρτάται από την επιλογή του θραύσματος ϋΝΑ. Σύμφωνα με αυτό, συντίθενται ολιγονουκλεοτίδια πλευρικών σπόρων. Η εξειδίκευση της υβριδοποίησης και της ολοκλήρωσης της αλυσίδας DNA οφείλεται στην αρχή της συμπληρωματικότητας των ακόλουθων ζευγών αζωτούχων βάσεων: αδενίνη-θυμίνη, γουανίνη-κυτοσίνη.

    Για να προσδιοριστεί η γονιδιωματική φυματιώδη σύμπλοκο μυκοβακτηρίδια πιο αποτελεσματική ενίσχυση στόχου στα περισσότερα συστήματα δοκιμής που επιλέγεται θραύσμα DNA του IS6110, η οποία στα περισσότερα στελέχη του γονιδιώματος Mycobacterium tuberculosis έχει ένα σημαντικό αριθμό (10-20) των επαναλήψεων, το οποίο παρέχει, μαζί με ειδικότητα, υψηλή ευαισθησία του προσδιορισμού. Ταυτόχρονα, στελέχη φυματίωσης Mycobacterium περιγράφεται με ένα μικρό αριθμό επαναλήψεων ή καθόλου θραύσμα IS6110.

    Απομόνωση μορίων DNA από βιολογικό δείγμα

    Για τη διεξαγωγή της PCR, τα μόρια του DNA του παθογόνου πρέπει να απομονώνονται από το βιολογικό υλικό σε έναν ελάχιστο όγκο, με μια ελάχιστη ποσότητα μη ειδικού DNA και διάφορους αναστολείς της πολυμεράσης ενζύμου-ϋΝΑ.

    Η προετοιμασία των δειγμάτων πρέπει να διεξάγεται υπό συνθήκες που εμποδίζουν τη διασταυρούμενη μόλυνση των δειγμάτων από τα απομονωμένα μόρια ϋΝΑ. Για να γίνει αυτό, είναι απαραίτητη η προεπεξεργασία του χώρου με υπεριώδες, δάπεδα και επιφάνειες εργασίας των γραφείων και των συσκευών με διαλύματα που περιέχουν χλώριο. Επίσης υποχρεωτική χρήση καθαρών γαντιών, δοκιμαστικών σωλήνων μίας χρήσης και άκρων σε αυτόματες πιπέτες.

    Για να απομονωθεί το DNA του Mycobacterium tuberculosis από κλινικά δείγματα (εγκεφαλονωτιαίο υγρό, βρογχικό έκπλυμα) που δεν περιέχει ένα μεγάλο αριθμό κυττάρων, κυτταρικά υπολείμματα, ή άλατα αυτών, αρκεί να φυγοκεντρήστε το δείγμα σε 3-4 χιλιάδες. Rpm, προσθέστε στο διάλυμα ιλύος 20-30 μΙ 2% Triton Χ-100 και θερμάνθηκε στους 90 ° C για 30 λεπτά.

    Για την παρασκευή των δειγμάτων πτυέλων πρέπει να είναι αποτελεσματική υγροποίηση, η οποία χρησιμοποιείται γενικά για ένα διάλυμα 4% υδροξειδίου του νατρίου και Ν-ακετυλο-L-κυστεΐνη (NALC) σε ποσότητα των 50-80 mg ανά δείγμα - ανάλογα με το ιξώδες του δείγματος. Το διάλυμα NALC πρέπει να παρασκευάζεται ex tempore ή η σκόνη NALC μπορεί να προστεθεί ξηρά στο δείγμα απευθείας. Μετά από την υγροποίηση, τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρηθούν για 15 λεπτά σε 3.5-4.000 rpm (3000 g) σε φιαλίδια των 50 ml με βιδωτά καπάκια, δηλαδή E. υπό τις ίδιες συνθήκες που συνιστώνται για την προετοιμασία της προετοιμασίας του φλέγματος.

    Για την εκχύλιση του DNA από τη μέθοδο σφαιρίδιο χρησιμοποιείται συχνότερα βασίζεται στη χρήση ενός 5-6 μοριακού διαλύματος αντιδραστηρίου λύσης ισοθειοκυανικής γουανιδίνης όπως τα μικροπορώδη σωματίδια και οξείδιο του πυριτίου ( «γη διατόμων») ροφούντος μόριο DNA. Η μη ειδική ουσίες, συμπεριλαμβανομένων των αναστολέων είναι δυνατόν, στη συνέχεια πλένονται σε ένα 2.5 μοριακό διάλυμα του ισοθειοκυανικού γουανιδινίου και διάλυμα αιθανόλης, μετά την οποία το μόριο DNA εκροφάται σε νερό, και αυτά τα δείγματα χρησιμοποιήθηκαν για την εκτέλεση της PCR. Για να απλοποιηθεί η τεχνολογία της απομόνωσης του DNA «γη διατόμων» είναι συχνά αντικαθίσταται με μαγνητικά μικροσωματίδια επικαλυμμένα με οξείδιο του πυριτίου. Σε αυτή την περίπτωση, χρησιμοποιείται ειδική μαγνητική βάση για μικροσωλήνες αντί για φυγοκέντρηση για να καθιζάνουν τα σωματίδια.

    Στη Ρωσία αναπτύχθηκε μια πρωτότυπη μέθοδος ανοσομαγνητικού διαχωρισμού των μυκοβακτηρίων με επακόλουθη εκχύλιση του DNA του παθογόνου. Για Mycobacterium tuberculosis ανοσομαγνητικό διαχωρισμό χρησιμοποιώντας ferroparticles μέγεθος των 3-5 microns, επικαλυμμένα με διοξείδιο του πυριτίου, στην οποία επισυνάπτονται με χημική πολυκλωνικό συγκόλληση (κουνέλι) αντισώματα σε Mycobacterium tuberculosis. Δείγματα πτύελου μετά από αλκαλική λύση εξουδετερώνουν με όξινο διάλυμα τρις-ΗΟΙ και επωάζονται με ανοσομαγνητικό προσροφητικό. Στη συνέχεια, τα ανοσοχημικά σωματίδια συλλέγονται με μαγνητική ράβδο με αντικαταστάσιμη άκρη, μεταφέρονται σε μικροσωλήνα και καταβυθίζονται. προσθέστε 20-30 μΐ διαλύματος 2% Triton Χ-100 και θερμαίνουμε για 30 λεπτά στους 90 ° C. Το υπερκείμενο χρησιμοποιείται ως πρότυπο DNA για ανάλυση PCR.

    Ένα δύσκολο πρόβλημα είναι η απομόνωση του DNA mycobacterium tuberculosis από δείγματα βιοψίας. Για τη βιοψία ενζύμων, η πρωτεϊνάση Κ ενζύμου χρησιμοποιείται σε τελική συγκέντρωση 200-500 mg / l σε θερμοκρασία 56 ° C όλη τη νύκτα. Περαιτέρω, χρησιμοποιείται μία από τις γνωστές μεθόδους. Η περίσσεια μη ειδικού DNA στην ανάλυση PCR βιοψιών προκαλεί συχνά την αναστολή της αντίδρασης, η οποία απαιτεί επαναλαμβανόμενη εκχύλιση του DNA.

    Μέθοδοι ανίχνευσης αποτελεσμάτων

    Μετά την ολοκλήρωση της αντίδρασης, τα ενισχυμένα θραύσματα DNA του παθογόνου αναγνωρίζονται με διάφορες μεθόδους.

    Η μέθοδος ηλεκτροφόρησης πηκτής είναι πολύ γνωστή. Τοιουτοτρόπως ληφθέν τεμάχιο DNA ταυτοποιήθηκαν με ένα θετικό έλεγχο που περιλαμβάνει τον επιθυμητό συγκεκριμένο θραύσμα DNA ή γνωστή εκ των προτέρων το μέγεθος (αριθμός των ζευγών βάσεων) κομμάτι που προσδιορίστηκε με πρότυπο μοριακό δείκτη.

    Παρουσία συγκεκριμένης χρωστικής, το βρωμιούχο αιθίδιο περιλαμβάνεται στο δίκλωνο DNA. το συντιθέμενο θραύσμα ϋΝΑ ανιχνεύεται ως λωρίδα φωτός υπό την επίδραση της υπεριώδους.

    Το μέγεθος του θραύσματος ϋΝΑ, που προσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση από την απόσταση από την αρχή, πρέπει να αντιστοιχεί σε έναν γνωστό δείκτη μοριακού βάρους ή θετικό έλεγχο.

    Άλλες μέθοδοι προσδιορισμού αποτελεσμάτων PCR με βάση τον υβριδισμό ενός απλής αλύσου προϊόντων PCR με ένα ολιγονουκλεοτίδιο συμπληρωματικό προς αυτό - σημασμένο με βιοτίνη DNA ανιχνευτή, που ακολουθείται από ανίχνευση μέσω ενζυματικές αντιδράσεις, για παράδειγμα δια συνδέσεως με στρεπταβιδίνη-βιοτίνη αλκαλική φωσφατάση.

    Βάσει αυτού του τύπου ανίχνευσης, δημιουργήθηκαν αναλυτές PCR, στους οποίους η ανίχνευση των αποτελεσμάτων PCR διεξάγεται αυτόματα ως αποτέλεσμα της ανάγνωσης της οπτικής πυκνότητας στα δείγματα μετά την εκδήλωση της ενζυματικής αντίδρασης.

    Τα μειονεκτήματα αυτών των μεθόδων είναι οι δυνατότητες εσωτερικής εργαστηριακής μόλυνσης από μάλλον σύντομα θραύσματα μορίων ϋΝΑ. Όταν τα μόρια εισάγονται σε νέα δείγματα, γίνονται μια μήτρα για PCR και οδηγούν σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα.

    Από την άποψη αυτή, για να αποφευχθούν τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα, εισάγονται αυστηροί κανόνες για τον διαχωρισμό και την απομόνωση των χώρων: να εξαχθεί το DNA από βιολογικά δείγματα, εγκαταστάσεις για την ανίχνευση αποτελεσμάτων (ηλεκτροφόρηση) από την καθαρή ζώνη. Οι χώροι αυτοί είναι μια ζώνη πιθανής μόλυνσης. Μια άλλη απομονωμένη περιοχή είναι ένας καθαρός χώρος για την εισαγωγή των δειγμάτων DNA που πρόκειται να δοκιμαστούν σε σωλήνες με ένα μείγμα αντίδρασης για PCR. Τέλος, θεωρείται ότι η κύρια συσκευή - ο ενισχυτής DNA - πρέπει να τοποθετηθεί σε ένα ξεχωριστό, ενδεχομένως γραφείο, δωμάτιο.

    Για να αποτραπεί η μόλυνση των προϊόντων από τις προηγούμενες αντιδράσεις - μερικά τεστ σύστημα Likon-amp PCR αντί dezoksinukleozidtimidina περιέχουν dezoksinukleoziduridin οποία, όταν ενσωματώνονται ίη vitro κύκλωμα συνθέσεως αντί στην κατάλληλη θέση, δηλαδή, Η αζωτούχος βάση της θυμίνης που υπάρχει στο φυσικό DNA αντικαθίσταται από ουρακίλη. Ουρακίλη ϋΝΑ γλυκοζυλάση προστίθεται στο μίγμα της αντίδρασης με τον αναλύτη, καταστρέφει μόνο μολυσματικά θραύσματα δεοξυουριδίνη, αλλά όχι το DNA μητρική αναλυθεί. αιθανόλης. Η επακόλουθη θέρμανση στους 94 ° C απενεργοποιεί αυτό το ένζυμο και δεν παρεμβαίνει στην ενίσχυση στην PCR.

    Υπάρχει ένα δοκιμαστικό σύστημα που βασίζεται στην ισοθερμική ενίσχυση του rRNA, για το οποίο διεξάγεται πρώτα η αντίστροφη μεταγραφή και η σύνθεση μορίων ϋΝΑ. η οποία, με τη σειρά της, είναι μια μήτρα για την επακόλουθη σύνθεση μορίων RNA. Αμπλικόνια RNA ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας ανιχνευτή ϋΝΑ χρωματισμένο με ακριδίνη όταν υβριδοποιείται σε διάλυμα σωλήνα αντίδρασης. Αυτή η μέθοδος, εκτός από την υψηλή ευαισθησία, έχει το πλεονέκτημα ότι αναλύεται σε έναν σωλήνα, ο οποίος αποτρέπει τη μόλυνση. Σύμφωνα με τους συγγραφείς, η ευαισθησία αυτής της μεθόδου σε αναπνευστικά δείγματα φθάνει το 90% με ειδικότητα 99-100%.

    Νέες μέθοδοι ανίχνευσης εφαρμόζονται σε PCR σε πραγματικό χρόνο. Αυτές οι μέθοδοι διαφέρουν κυρίως από το ότι η PCR και η ανίχνευση των αποτελεσμάτων της πραγματοποιούνται ταυτόχρονα σε έναν κλειστό σωλήνα. Αυτό όχι μόνο τεχνολογικά απλοποιεί την τεχνική της ανάλυσης, αλλά επίσης αποτρέπει τη μόλυνση των εργαστηριακών χώρων και των δειγμάτων δοκιμής με προϊόντα προηγούμενης PCR.

    Σε πραγματικό χρόνο αποτελέσματα ανίχνευσης PCR είναι λόγω του φθορισμού που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια ενός φθορισμογόνου DNA ανιχνευτή υβριδισμού με amplifitsi Rui-PCR κατά τη διάρκεια ενός ειδικού ϋΝΑ θραύσματος. Δομή φθορισμογόνα ανιχνευτές DNA κατασκευάζεται έτσι ώστε το φθορίζοντα δείκτη απελευθερώνεται ως αποτέλεσμα της ενζυματικής αντίδρασης ή σε απόσταση από τον φθορισμό μόριο απόσβεσης μόνο υπό ειδικό υβριδισμό με το επιθυμητό μόριο DNA που πρόκειται να ενισχυθεί κατά τη διάρκεια της PCR. Καθώς ο αριθμός των μορίων ανιχνευτή υβριδοποιήθηκε με την αύξηση στο φθορισμό είναι ανάλογη με τη ανιχνεύεται επίπεδο του αριθμού των μορίων του ενισχυμένου προϊόντος. Δεδομένου ότι σε κάθε αριθμό κύκλο των PCR μόριο θραύσματος DNA πολλαπλασιάζεται με το ήμισυ, τον αριθμό κύκλος στον οποίο προσδιορίζεται ο φθορισμός και αυξάνει αντιστρόφως ανάλογη προς τον αριθμό των μορίων του DNA στο αρχικό δείγμα. Εάν η αντίδραση είναι να εισαγάγει ως βαθμονομητή αρκετές διαφορετικές γνωστές συγκεντρώσεις των μορίων αντίστοιχο θραύσμα DNA του Mycobacterium tuberculosis, χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα υπολογιστή μπορεί να υπολογιστεί και η ποσότητα του γενωμικού DNA στο υλικό δοκιμής.

    Κάθε τυποποιημένο δείγμα αντιγράφεται. Το ποσοτικό κριτήριο είναι ο ελάχιστος αριθμός κύκλων PCR που είναι απαραίτητοι για την εμφάνιση και ανάπτυξη του προσδιορισμένου φθορισμού. Στη τετριμμένη - ο αριθμός των κύκλων. η τεταγμένη είναι η τιμή φθορισμού. Οι συγκεντρώσεις DNA είναι αντιστρόφως ανάλογες με τον αριθμό των κύκλων που απαιτούνται για την εμφάνιση φθορισμού. Στη δεξιά στήλη (21-32) σημειώνονται οι αριθμοί κύκλων για τις αντίστοιχες συγκεντρώσεις. Διαφορές μεταξύ δεκαπλάσιας συγκέντρωσης θραυσμάτων DNA 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 κύκλοι. Για δύο ασθενείς, οι συγκεντρώσεις των θραυσμάτων IS6110 ήταν περίπου 103 / ml και 104 / ml. Λαμβάνοντας υπόψη τον αριθμό των επαναλήψεων (6-20) των θραυσμάτων που αναλύθηκαν στο γονιδίωμα του Mycobacterium tuberculosis, ο αριθμός των μυκοβακτηρίων σε κλινικά δείγματα είναι περίπου 100 και 1000 κύτταρα, αντίστοιχα.

    Η χρήση της PCR στη διάγνωση της φυματίωσης

    Η μέθοδος PCR χρησιμοποιείται περισσότερο για την επιτάχυνση της διάγνωσης της φυματίωσης - ανίχνευση του mycobacterium tuberculosis σε κλινικά δείγματα: πτύελα. βρογχικό έκπλυμα, πλευριτικό εξίδρωμα, ούρα, εγκεφαλονωτιαίο υγρό, punctates οστεόλυση, θηλυκό αναρροφήσεις γεννητικού συστήματος και βιοψίες διαφορετικά. Στη μελέτη στην Ολλανδία περίπου 500 πτύελα και βρογχικό έκπλυμα δείγματα από 340 ασθενείς με επιβεβαιωμένη διάγνωση της πνευμονικής φυματίωσης μελετήθηκαν για να συγκριθεί η ευαισθησία των μεθόδων PCR, μικροσκοπία και μελέτες καλλιέργειας επιχρίσματα. Η ευαισθησία της ανάλυσης ήταν 92,6,88,9 και 52,4% αντίστοιχα. Η ειδικότητα όλων των μεθόδων ήταν περίπου 99%.

    Η αποτελεσματικότητα της ανίχνευσης μυκοβακτηριδίου φυματίωσης με μικροσκοπία κηλίδας, σπορά στο μέσο Levenstein-Jensen, σύστημα δοκιμής VASTES και ανάλυση PCR συγκρίθηκε. Η PCR έδειξε ευαισθησία 74,4%, μικροσκοπία - 33,8%, σπορά σε πυκνό μέσο - 48,9% και VASTES - 55,8%. Ο μέσος χρόνος ανίχνευσης για σπορά σε μέσο Levenstein-Jensen είναι 24 ημέρες. VASTES - 13 ημέρες, PCR - 1 ημέρα.

    Αναφέρονται επίσης οι δυνατότητες χρήσης της PCR ως ευαίσθητης και ταχείας μεθόδου για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας της φυματίωσης.

    Ανίχνευση του Mycobacterium tuberculosis DNA με PCR με αποτελεσματική χημειοθεραπεία προσδιορίζεται επί ένα μεγαλύτερο χρονικό διάστημα - κατά μέσο όρο 1,7 μήνες σε σύγκριση με επίχρισμα ορίζεται υπό μικροσκοπία φθορισμού, και από 2,5 μήνες σε σύγκριση με τη βακτηριολογική εξέταση.

    Διάγνωση εξωπνευμονικών μορφών φυματίωσης

    Αξία ως ευαίσθητη μέθοδος PCR είναι ιδιαίτερα μεγάλο για εξωπνευμονική μορφές, καθώς σχηματίζεται υπό αυτές τις κλινικές και ραδιογραφικές μεθόδους συμβατικές βακτηριολογική μέθοδοι για τον προσδιορισμό του Mycobacterium tuberculosis σε διαγνωστικές υλικά αναποτελεσματική.

    Κατά την έρευνα των δειγμάτων ούρων αποτελέσματα της PCR ήταν θετικά σε 16 από 17 ασθενείς με ενεργή ΤΒ και αρνητικών ουροποιητικού 4 ασθενείς ανενεργό νεφρική φυματίωση και 39 ασθενείς με ουρική nontubercular νόσο συστήματος.

    Η αποτελεσματικότητα της ανάλυσης PCR στη μελέτη των αναρτήσεων μυελού των οστών σε ασθενείς με πυρετό άγνωστης προέλευσης καταδείχθηκε σε περιπτώσεις υποψίας φυματίωσης. Για τη διάγνωση της φυματιώδους λεμφαδενίτιδας, μελετήθηκαν 102 αναρροφήματα διάτρησης και ένα δείγμα βιοψίας 67 παιδιών με υποψία για φυματιώδη λεμφαδενίτιδα σε παιδιά. Τα θετικά αποτελέσματα ελήφθησαν: 71,6% PCR σε πραγματικό χρόνο. φθορίζουσα μικροσκοπία - 46,3%. έρευνα για τον πολιτισμό - 41,8%. Στη μελέτη των 50 βιοψιών των λεμφογαγγλίων σε ασθενείς με ασθένεια "μηδέν", όλα τα αποτελέσματα ήταν αρνητικά. Έτσι, αποδείχθηκε 100% εξειδίκευση της PCR. Στην ίδια εργασία, με βιοψία παρακέντησης των λεμφαδένων, αποδείχθηκε η πιθανότητα ανίχνευσης του M. avium.

    Διάγνωση της φυματίωσης γυναικείων γεννητικών οργάνων για τη στειρότητα, όπως είναι γνωστό, είναι ένα από τα πιο δύσκολα διαγνωστικά προβλήματα. Όταν εξετάστηκαν με PCR βιοψίες του ενδομητρίου, ενδομητρίου αναρροφήσεις υγρά δείγματα από Douglas χώρο 14 (56%) των 25 ασθενών που εξετάστηκαν λαπαροσκοπικά υποψία φυματίωσης, ελήφθησαν θετικά αποτελέσματα. Χρησιμοποιώντας τη μικροσκοπία και την καλλιέργεια, ελήφθησαν 1 και 2 αποτελέσματα αντίστοιχα. Αυτές οι περιπτώσεις ήταν επίσης θετικές σε PCR. Τα περισσότερα θετικά αποτελέσματα PCR σχετίζονταν με περιπτώσεις με χαρακτηριστικά σημεία της φυματίωσης σύμφωνα με την ιστολογική μελέτη. ένας μικρότερος αριθμός - με υποψία φυματίωσης σύμφωνα με δεδομένα λαπαροσκόπησης. Μόνο ένα θετικό αποτέλεσμα της ανάλυσης PCR λήφθηκε απουσία λαπαροσκοπικών δεδομένων για τη φυματίωση.

    Κατά τη διάγνωση εξωπνευμονικών μορφών φυματίωσης, οι κλινικοί γιατροί έχουν συχνά μια ερώτηση σχετικά με τη δυνατότητα ανίχνευσης ενός παθογόνου παράγοντα όταν εξετάζονται δείγματα αίματος με τη μέθοδο PCR. Τα λογοτεχνικά δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ανίχνευση ϋΝΑ από το μυκοβακτηρίδιο της φυματίωσης από δείγματα αίματος είναι δυνατή με εκτεταμένες μορφές μόλυνσης από HIV. Το DNA του mycobacterium tuberculosis ανιχνεύθηκε μόνο με γενικευμένη φυματίωση διαφόρων οργάνων σε ασθενείς με μεταμοσχευμένο νεφρό και ανοσοκαταστολή.

    Προσδιορισμός ειδών των μυκοβακτηρίων

    Η μέθοδος PCR μπορεί να είναι αρκετά αποτελεσματική για την ταχεία ταυτοποίηση των μυκοβακτηριδίων των πολύπλοκων φυματίωσης και ορισμένα είδη των μυκοβακτηριδίων nontubercular δέχτηκε την αρχική τους ανάπτυξη. Σε αυτή την περίπτωση, η χρήση PCR μπορεί να εξοικονομήσει 7-10 ημέρες, απαραίτητη για την επακόλουθη πολιτιστική αναγνώριση ενός θετικού αποτελέσματος. Έρευνα PCR είναι τεχνικώς πολύ απλό, δεδομένου ότι δεν απαιτεί περίπλοκη προετοιμασία δείγματος κλινικό υλικό για να επιτευχθεί υψηλή ευαισθησία. Στη μελέτη 80 θετικά σε αυτό το σύστημα δοκιμής (MB Vasto. Organon εταιρείας) όλες οι θετικές καλλιέργειες της PCR ήταν απολύτως συγκεκριμένη και κρατήθηκε για 1 ημέρα. Για την ταυτοποίηση άλλα είδη μυκοβακτηριδίων στην παρασκευή του DNA της καλλιέργειας παθογόνου υβριδοποιήθηκε με ειδικούς DNA ανιχνευτές σημάνθηκαν με ακριδίνης και στελέχη που ανιχνεύεται από την εμφάνιση της χημικής φωταύγειας μέσω μετρητή χημειοφωταύγειας ή νιτροκυτταρίνη λωρίδες με οπτική αξιολόγηση μετά από υβριδισμό. Με τη βοήθεια ενός τέτοιου συνόλου, αναγνωρίζεται ένας περιορισμένος αριθμός ειδών: το σύμπλεγμα mycobacterium tuberculosis. Μ. Avium, Μ. Avium complex, Μ. Kansasii και Μ. Gordonae.

    Α. Telenti et αϊ. επίσης αναπτύξει μια σχετικά απλή και φθηνή μέθοδο ταυτοποίησης ειδών των κλινικά σημαντικών ειδών μυκοβακτηριδίων δια PCR και επακόλουθη κατεργασία με δύο ένζυμα περιορισμού (ένζυμα που έχουν ιδιότητες κόψει ένα μόριο DNA σε συγκεκριμένα σημεία). Το θραύσμα ϋΝΑ ενισχύεται. που κωδικοποιεί μια πρωτεΐνη θερμικού σοκ (65 kDa), και στη συνέχεια κατεργάστηκε στο προκύπτον θραύσμα PCR ϋΝΑ των 439 ζεύγη νουκλεοτιδίων χωριστά δύο ένζυμα - BstE II και Hae III. Στη συνέχεια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης που λαμβάνονται δύο προϊόντα, τον προσδιορισμό του μεγέθους τους (αριθμός ζευγών βάσεων) χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο σύνολο τεμαχίων ϋΝΑ (μοριακό DNA-δείκτες) σε μήκος από 100 έως 1000 ζεύγη βάσεων. Σε καθένα από τα συγκεκριμένα είδη (M. tuberculosis, M. avium, Μ intracellulare, Μ kansasii, M.fortuitum) ανίχνευση δύο ή τρία τεμάχια DNA διαφορετικού μεγέθους για κάθε ένζυμο περιορισμού. Ο συνδυασμός διαφορετικών μεγεθών DNA επιτρέπει τη διαφοροποίηση αυτών των ειδών μεταξύ τους.

    Η τεχνολογία των βιολογικών DNA microarrays αναπτύσσεται. που θα βοηθήσουν στην αναγνώριση περισσότερων από 100 ειδών μυκοβακτηριδίων σε μία μελέτη.

    Η ταυτοποίηση των ειδών μπορεί επίσης να εκτελεστεί με PCR ενίσχυση του 16S rRNA μεταβλητής περιοχής που ακολουθείται από ανάλυση αλληλουχίας των αμπλικονίων όταν συγκρίνεται με την αντίστοιχη πρωτοταγή δομή που επιτρέπει την ταυτοποίηση των περισσότερα από 40 είδη των μυκοβακτηριδίων.

    Με τη βοήθεια PCR, μπορεί να διεξαχθεί και ταυτοποίηση ειδών εντός του συμπλέγματος mycobacterium tuberculosis, συμπεριλαμβανομένης της διαφοροποίησης του Μ. Bovis και του Μ. Bovis BCG. Για να γίνει αυτό, αναλύεται η παρουσία ή η απουσία μερικών γονιδίων στις γονιδιωματικές περιοχές του RD1. RD9 και RD10. Το RD1 απουσιάζει στο Μ. Bovis BCG, αλλά υπάρχει σε λοιμογόνα είδη, συμπεριλαμβανομένου του Μ. Bovis.

    Προσδιορισμός ευαισθησίας φαρμάκου του Mycobacterium tuberculosis με PCR

    Στόχοι της μοριακής γενετικής μεθόδων για ευαισθησία φαρμάκου ή αντίσταση του Mycobacterium tuberculosis μειώσει την ταυτοποίηση μεταλλάξεων σε ειδικές νουκλεοτιδικές αλληλουχίες γνωστών γονιδίων. Οι βασικές μέθοδοι βασίζονται είτε στην άμεση prochityvanii (αλληλούχιση) αυτών των αλληλουχιών μετά από την ενίσχυση ή υβριδοποίηση των θραυσμάτων DNA με βιοτίνη σημασμένο ενισχυμένο κατά τη διάρκεια των ανιχνευτών PCR DNA. Και οι δύο εναλλακτικές λύσεις περιλαμβάνουν τον εντοπισμό των υποκαταστάσεις νουκλεοτιδίων στις αλληλουχίες που χρησιμοποιούν ανιχνευτές DNA να οδηγήσει σε απουσία ή ελλιπή υβριδισμό σε μία μεμβράνη νιτροκυτταρίνης χρησιμοποιώντας ένζυμο συζυγές (στρεπταβιδίνη-αλκαλική φωσφατάση) - Μέθοδος LIPA-Rif-ΤΒ.

    Μέθοδος για τη μέτρηση του φθορισμού σε ένα τοπικά σταθερό επί microsections DNA ανιχνευτών συμπληρωματικών με γνωστές μεταλλάξεις στα ενισχυμένα PCR γονιδιακές περιοχές υπεύθυνες για την ανθεκτικότητα ή ευαισθησία φαρμάκου, που ονομάζεται mikrobiochipov μέθοδο. Ο κύριος αλγόριθμος για τη διεξαγωγή αυτής της έρευνας έχει ως εξής. Μετά την απομόνωση του DNA από ένα κλινικό δείγμα ή καλλιέργεια μυκοβακτηριδίων είναι απαραίτητες για τη διεξαγωγή PCR ενίσχυση των σχετικών θραυσμάτων του γονιδίου rpoB υπεύθυνο για την ευαισθησία φαρμάκου σε ριφαμπικίνη ή γονίδια katG και Inha που κωδικοποιούν πρωτεΐνες του Mycobacterium είναι υπεύθυνες για την ευαισθησία σε ισονιαζίδιο. αποτελέσματα PCR αξιολογήθηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης, στο οποίο επιβεβαιώνει τη λήψη των κατάλληλων θραυσμάτων DNA του επιθυμητού μήκους. Στη συνέχεια, πραγματοποιείται ένας δεύτερος κύκλος PCR για να εισαχθεί μια φθορίζουσα σήμανση στο DNA. Τα αποτελέσματα της PCR επιβεβαιώνονται και πάλι με ηλεκτροφόρηση πηκτής. Στη συνέχεια, η υβριδοποίηση εκτελέστηκε (ολονύκτια επώαση), ακολουθούμενη από πλύση του προκύπτοντος υλικού επί του βιοτσίπ, το οποίο είναι ένα μεγάλο αριθμό σταθερών σε ένα μικρό γυάλινη πλάκα σύντομο κλώνων DNA (ανιχνευτές), τα οποία είναι συμπληρωματικά με αλληλουχίες νουκλεοτιδίων του φαρμάκου-ευαίσθητου τύπου Mycobacterium tuberculosis στα σημεία των πιθανών μεταλλάξεων. καθώς και στις μεταλλαγμένες αλληλουχίες που είναι υπεύθυνες για την αντοχή στα φάρμακα. Τοποθεσία των ανιχνευτών DNA στην πλάκα - αυστηρά καθορισμένες, και το επίπεδο φθορισμού που παρατηρείται κατά υβριδισμού για να προσδιοριστεί το αποτέλεσμα χρησιμοποιώντας μια ειδική συσκευή ανάγνωσης έχει εγκατασταθεί. Από την άποψη αυτή, τα αποτελέσματα της ανάλυσης προσδιορίζονται μέσω ενός ειδικού προγράμματος ηλεκτρονικών υπολογιστών.

    Τα τελευταία χρόνια έχουν αναπτυχθεί εναλλακτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας του φαρμάκου στη φυματίωση μυκοβακτηρίων με βάση την τεχνολογία PCR σε πραγματικό χρόνο, οι οποίες καθιστούν δυνατή τη διεξαγωγή αυτών των μελετών σε δοκιμή κλειστού σωλήνα.

    Στο Σχ. 13-13 δείχνει το αποτέλεσμα της ανάλυσης των κλινικών απομονώσεων του Mycobacterium tuberculosis σε προσδιορισμό αντίσταση σε ριφαμπικίνη με PCR σε πραγματικό χρόνο: 218 - δείγμα ελέγχου (ευαίσθητα σε ριφαμπικίνη)? 93 - θετικός έλεγχος για τη μετάλλαξη του Ser-Trp TCG-TGG. 4482 - θετικός έλεγχος για μετάλλαξη του Ser-Leu TCG-TTG. 162-322 - πειραματικά δείγματα. Το αποτέλεσμα του υπολογισμού των κινητικών καμπυλών της ενίσχυσης των τεσσάρων καναλιών: Κανάλι 1: 393 - θετικός μάρτυρας για μετάλλαξη Ser-Trp TCG-TGG? κανάλι 2: 4482 - θετικός έλεγχος για μετάλλαξη του Ser-Leu TCG-TTG. 162, 163, 172, 295 - πειραματικά δείγματα. κανάλι 4: κινητικές καμπύλες ενίσχυσης όλων των δειγμάτων που συμμετέχουν στο πείραμα. Θετικός έλεγχος της αντίδρασης ενίσχυσης. Συμπεράσματα: Τα αποτελέσματα της ανάλυσης απεκάλυψε τα ακόλουθα μεταλλάξεις που καθορίζουν την αντίσταση σε ριφαμπικίνη: σε δείγματα 162163172295 - Ser-Leu TCG-TTG. Η ίδια αρχή χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της αντίστασης στην ισονιαζίδη σχετικά γονίδια katG και Inha, προσδιορισμό των πιο συχνές μεταλλάξεις.

    Προσδιορισμός στελεχών του mycobacterium tuberculosis

    Η πιο εκτενώς μελετημένους μέθοδος ταυτοποίησης των στελεχών του Mycobacterium tuberculosis είναι μια τεχνική που ονομάζεται πολυμορφισμό μήκους θραύσματος περιορισμού (RFLP RFLP,. Ή στην αγγλική έκδοση) και η οποία βασίζεται στην fragmentirovanin (περιορισμού) του ενζύμου Mycobacterium tuberculosis DNA Ρνυ II και τα θραύσματα που λαμβάνονται επακόλουθη υβριδοποίηση με ορισμένες ειδικές αλληλουχίες επί ϋΝΑ το επαναλαμβανόμενο στοιχείο IS6110. Η ενδο-ειδική μεταβλητότητα πραγματοποιείται λόγω του διαφορετικού αριθμού επαναλήψεων του IS6110 και της θέσης τους στο DNA. καθώς και την ποικιλία των αποστάσεων μεταξύ ορισμένων σημείων προσβολής ενζυμικών περιοριστικών ενζύμων (θέσεις περιορισμού) και του IS6110 στοιχείου. Αυτή η τεχνολογία είναι πολύ περίπλοκη και χρονοβόρα. Μετά την επεξεργασία με ϋΝΑ που εξάγεται από μία καλλιέργεια του Mycobacterium tuberculosis, ηλεκτροφόρηση πηκτής πραγματοποιείται με ένα ένζυμο περιορισμού, και στη συνέχεια μεταφέρθηκε ϋΝΑ θραύσματα διαφορετικών μηκών επί μεμβράνης νιτροκυτταρίνης, η υβριδοποίηση διεξήχθη με θραύσματα του IS6110-στοιχείου και ανιχνεύονται με τη βοήθεια του ενζυματικές αντιδράσεις. Το πρότυπο που προέκυψε συγκεκριμένες ζώνες DNA χαρακτηρίζει το συγκεκριμένο στέλεχος του Mycobacterium tuberculosis. Με τη βοήθεια της ανάλυσης υπολογιστή, αποκαλύπτεται η ταυτότητα ή η συγγένεια των στελεχών. Παρά το γεγονός ότι η μέθοδος RFLP είναι η πλέον διακριτική, δηλ. προσδιορίζει τον μεγαλύτερο αριθμό των διαφορών στα στελέχη που αναλύθηκαν, είναι αναποτελεσματικό για έναν μικρό αριθμό (λιγότερο από 5) IS6110-επαναλήψεις παρατηρούνται σε μερικά στελέχη. Στο Σχ. Τα σχήματα 13-14 δείχνουν τα αποτελέσματα της τυποποίησης RFLP των στελεχών.

    Μια εναλλακτική λύση μπορεί να είναι η μέθοδος της εμπλουτισμό - ανάλυση του πολυμορφισμού των διαχωριστικών αλληλουχιών ϋΝΑ - ενδιάμεση μεταξύ των άμεσων επαναλήψεων της περιοχής DR. Κατά τη διεξαγωγή spoligotyping στελέχη πραγματοποιήθηκε PCR με εκκινητές τμήμα DR-περιοριστικά, οπότε θραύσματα διαφορετικού μήκους σχηματίζονται τα οποία υβριδοποιούνται με μεταβλητή ενδιάμεσα τμήματα του DNA. Παρουσιάζεται ανάλυση των διαχωριστικών αλληλουχιών της περιοχής DR. σύμφωνα με τους ερευνητές, πιο απλή, παραγωγική και κατάλληλη για πρωτογενή διαλογή στελεχών και προκαταρκτική επιδημιολογική ανάλυση, καθώς και για άμεσο κλινικό υλικό έρευνας.

    Προφανώς, πιο αποτελεσματική και τεχνολογικά προσπελάσιμη μέθοδος είναι η VNTR (συντομογραφία των αγγλικών λέξεων) ή μια μέθοδος για τον προσδιορισμό του μεταβλητού αριθμού των ακριβών επαναλαμβανόμενων αλληλουχιών στο DNA του mycobacterium tuberculosis. Αυτή η μέθοδος βασίζεται μόνο στη χρήση PCR και δεν απαιτεί πρόσθετο χειρισμό. Δεδομένου ότι ο αριθμός των διαδοχικών επαναλήψεων σε διαφορετικά στελέχη και σε διαφορετικούς τόπους είναι διαφορετικός, τα θραύσματα διαφορετικών μεγεθών προσδιορίζονται και αναλύονται επί του προκύπτοντος ηλεκτροφογράμματος προϊόντων PCR. Σύμφωνα με τους ερευνητές, η χρήση του VNTR επιτυγχάνει μεγαλύτερο βαθμό διάκρισης των στελεχών παρά με τη μέθοδο RFLP.

    Έχει δοθεί μεγάλη προσοχή τα τελευταία χρόνια στην κατανομή των στελεχών Mycobacterium tuberculosis της οικογένειας W-Beijing (που μερικές φορές αποκαλείται στέλεχος του Πεκίνου), τα οποία είναι σε μεγάλο βαθμό ανθεκτικά στα ναρκωτικά.

    Βασικές απαιτήσεις για την ποιότητα της μοριακής βιολογικής έρευνας

    Βασικά ρυθμιστικά έγγραφα για την PCR

    Παραγγελίες ρωσικό Υπουργείο Υγείας: №45 από 07.02.2000 γρ.. αριθμό 109 από 21.03.2003 γρ.. αριθμό 64 από 21/02/2000, οι κατευθυντήριες γραμμές: 1.3.1888-04 «Οργάνωση των εργασιών σε μελέτες με τη χρήση υλικών PCR έχουν μολυνθεί με παθογόνους βιολογικούς παράγοντες των ομάδων ΙΙΙ-ΐν της παθογονικότητας ". 1.3.1794-03 «Οργάνωση των μελετών με τη χρήση PCR με υλικό μολυνθεί από μικροοργανισμούς ομάδες παθογένεια I-II». 2003; 3.5.5.1034-01 «Απολύμανση του υλικού, μολυσμένα βακτήρια Ι-ΐν ομάδων παθογένειας όταν χρησιμοποιείται PCR,» 2001 Το προσάρτημα 11 με τις ενοποιημένη οδηγίες για μικροβιολογικές μεθόδους εξέτασης για τον εντοπισμό, τη διάγνωση και τη θεραπεία της φυματίωσης.

    Το προσωπικό

    Εκτέλεση της μοριακής βιολογικής έρευνας μπορεί να κρατήσει τους γιατρούς της κλινικής εργαστηριακή διάγνωση, οι γιατροί βακτηριολόγους, ιολόγοι, οι γιατροί, οι βιολόγοι, οι κλινικές διαγνωστικό εργαστήριο, καθώς και ειδικοί με δευτεροβάθμια ιατρική εκπαίδευση, πέρασε την εξειδίκευση και την προηγμένη κατάρτιση με τον προβλεπόμενο τρόπο.

    Διευθέτηση εργαστηριακών χώρων

    Απαιτούνται τα ακόλουθα εργαστήρια:

    • Η περιοχή χειρισμού δειγμάτων είναι ένα εργαστήριο προσαρμοσμένο να συνεργάζεται με μολυσματικούς παράγοντες των ομάδων παθογένειας III-IV, σύμφωνα με τις Μεθοδολογικές Οδηγίες 13.1888-04.
    • Ζώνη για την παρασκευή μιγμάτων αντίδρασης PCR - εργαστηριακός χώρος, ο οποίος παρέχει προστασία από εσωτερική εργαστηριακή μόλυνση - "καθαρή" ζώνη.
    • • Εάν χρησιμοποιείται ηλεκτροφόρηση ή υβριδισμός για την ανάλυση προϊόντων PCR. αίθουσα εργαστηρίου στο οποίο οι πολλαπλούν θραύσματα DNA που εκχυλίζεται από τους σωλήνες και ενισχύσεως, αντιστοίχως, μπορεί να μπει στο περιβάλλον, σύμφωνα με τις απαιτήσεις για τα εργαστήρια PCR (1.3.1794-03 κατευθυντήριες γραμμές, Προσανατολισμού 1.3.1888-04) πρέπει να είναι πλήρως απομονώνεται από τις εγκαταστάσεις που αναφέρονται στις προηγούμενες παραγράφους. Θα πρέπει να εξαιρεθούν από τη ζώνη κινήματος στη ζώνη ηλεκτροφόρησης για το χειρισμό των δειγμάτων και ένα «καθαρό» χώρο για τυχόν προσωπικό, εξοπλισμό, οποιαδήποτε υλικά και αντικείμενα, καθώς και τη μεταφορά του αέρα μέσω του συστήματος εξαερισμού, είτε ως αποτέλεσμα των σχεδίων. Αυτή η ζώνη δεν απαιτείται για τη φθοριομετρική ανίχνευση προϊόντων PCR.
    • Ο χώρος τεκμηρίωσης και επεξεργασίας των αποτελεσμάτων είναι εξοπλισμένος με ηλεκτρονικούς υπολογιστές και απαραίτητο εξοπλισμό γραφείου. Αυτό το δωμάτιο μπορεί να περιέχει εξοπλισμό που παρέχει ανίχνευση προϊόντων PCR χωρίς το άνοιγμα του σωλήνα. - ανιχνευτές φθορισμού PCR και θερμικοί ανακυκλωτές για PCR σε πραγματικό χρόνο.

    Οι υγειονομικές και επιδημιολογικές απαιτήσεις για την πρωτογενή αντιμετώπιση των πτυέλων είναι παρόμοιες με τις τυπικές μικροβιολογικές απαιτήσεις για την αντιμετώπιση της φυματίωσης από μυκοβακτηρίδια.

    Ολοκλήρωση εργαστηριακού εξοπλισμού για διάγνωση PCR

    Το εργαστήριο περιλαμβάνει εξοπλισμό για τους ακόλουθους χώρους.

    • αίθουσα προετοιμασίας δειγμάτων, περιέχει τον ακόλουθο εξοπλισμό: στρωτή από την κατηγορία II προστασίας "SP-1.2": θερμοστάτης στερεάς κατάστασης με κάλυμμα θέρμανσης για δοκιμαστικούς σωλήνες τύπου "Eppendorf". μικροφυγόκεντρο στις 13.000 σ.α.λ. μια φυγόκεντρο (Vortex). ψυγείο με εύρος θερμοκρασιών από -20 ° C έως +10 ° C; πιπέτες μεταβλητού όγκου της σειράς "Rroline". αντλία με φιάλη παγίδευσης OM-1 · ένα τρίποδο για πιπέτες. Σταθμός εργασίας τρίποδα 200x0,5 ml. Σταθμός εργασίας τριπόδων 50x1,5 ml. Βάσεις για την αποθήκευση δοκιμαστικών σωλήνων 80x1,5 ml.
    • Χώρος παρασκευής μείγματος αντίδρασης: προστατευτικό θάλαμο PCR-box ("Laminar-C, 110 cm)". φυγόκεντρος - Vortex. Πιπέτες μεταβλητού όγκου της σειράς Proline. ένα τρίποδο για πιπέτες. Σταθμός εργασίας τρίποδων 200x0,2 ml. Βάσεις για την αποθήκευση δοκιμαστικών σωλήνων 80x1,5 ml. ψυγείο με εύρος θερμοκρασιών από -20 ° C έως + 10 ° C;
    • χώρος ηλεκτροφόρησης: κάμερα για οριζόντια ηλεκτροφόρηση. τροφοδοσία ρεύματος. transilluminator;
    • Ενισχυτές DNA ή αναλυτές νουκλεϊνικών οξέων (PCR σε πραγματικό χρόνο) με υπολογιστή και λογισμικό. μπορεί να τοποθετηθεί σε οποιοδήποτε ελεύθερο δωμάτιο. Εάν χρησιμοποιείται τεχνολογία PCR σε πραγματικό χρόνο. δεν απαιτείται χώρος για ηλεκτροφόρηση.

    Εξωτερικός έλεγχος ποιότητας

    Για να είναι σίγουροι για την επίτευξη αντικειμενικά αξιόπιστων αποτελεσμάτων, τα εργαστήρια θα πρέπει να συμμετέχουν στο σύστημα της εξωτερικής αξιολόγησης της ποιότητας της εργαστηριακής έρευνας.

    Συμμετέχουν οι συμμετέχοντες στο σύστημα ποιοτικού ελέγχου. 12 φιαλίδια των λυοφιλιωμένης εναιωρήματα βακτηριακό κύτταρο, δύο εκ των οποίων περιέχουν το E. coli Ε κοκοφοίνικα, 3 φιαλίδια με Mycobacterium tuberculosis (μη παθογόνο στέλεχος) στα 10 2 / ml? 3 φύσιγγες με κύτταρα παρόμοιου στελέχους σε συγκέντρωση 109 / ml. 2 αμπούλες nontubercular mycobacterium M. avium-intracellulare και Μ kansasii σε μία συγκέντρωση 10 5 / ml.

    Οι κατανεμημένες δοκιμές για εξωτερική αξιολόγηση της ποιότητας υποβάλλονται σε δοκιμασία σε δύο ανεξάρτητα εργαστήρια με μεγάλη εμπειρία σε αυτόν τον τομέα.